CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

con sales de Hanks (I-IMEM), con 100 U/ml de penicilina y 250 ug/ml de es-
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treptomicina en tubos de tapones de silicona. Incuba 10 larvas/ml en tubos
con 5 ml de HMEM. Mantiene los cultivos a 379C en agitación constante a 0,5
r.p.m.. Semanalmente examina los tubos y cuando presentan contaminación o
la mortalidad supera el 5% desecha los cultivos. En los tubos de aspecto
satisfactorio aspira el medio asépticamente y lo reemplaza por medio esté-
ril. Centrifuga el medio para eliminar las larvas que pudieran haberse as-
pirado. Finalmente, dializa y concentra por presión positiva, seguida de
liofilización, determinando la concentración proteica espectrofotométrica—
mente a 280 tun.
CARLIER (1.982) mantiene larvas de segundo estadio en un medio libre
de proteínas y extrae las sustancias de excreción—secreción liberadas por
la larva mediante el método de DE SAVIGNY (1.975).
Posteriormente, en la misma línea, SMITH y col. (1.980; 1.981; 1.982;
1.983, a) filtran el medio por0,45 um para eliminar las larvas transferi-
das accidentalmente al extraer el mismo. Concentran diez veces en Amicon
con filtro nl 2, liofilizan y conservan a —702C.
OSHIMA (1.983), HATSUMURA y ENDO (1.983), VAN KNAPEN (1.982; 1.983),
obtienen el antígeno E/S de T.canis por la misma técnica, así como KOIZUMI
(1.983), que determina la concentración de proteinas por el método de
HARTREE (1.972) y la de carbohidratos según la técnica de ROE (1.955).
ARO—SENADA y col. (1.985), tras utilizar el método de DE SAVIGNY
(1.975), fraccionan el medio de cultivo que contiene los productos de ex-
creción—secreción y lo concentran por liofilización hasta obtener 8 mg de
proteina/mí, concentración estimada por el método de BIURET. -
GUPTA (1.984) obtiene antígeno EIS cultivando las larvas en Medio Mí-
nimo Esencial con antibióticos. Introduce alguna modificación, tal como
ajustar el pH de los cultivos a 6,4—6,5, mantenerlos 24 horas en un
incubador de anhídrido carbónico, cambiar el medio cada 15 días e incubar-
los a 159C. Tras purificar a través de filtros de 0,45 um, precipita con
sulfato amónico saturado, redisuelve y dializa frente a solución salina.
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