CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

e) - Recoger el filtrado, en fracciones de aproximadamente 2 ml.
leyendo la 13.0. a 280 tun, para calcular la cantidad de proteina
contenida en el mismo.
f) — Filtrar la muestra recogida por 0,45 mii, inactivar, fraccionar y
congelar.
g) - Lavar la columna con 25 ml de tampón P,B.S. y recuperar la misma
eluyendo con glicina-clorhídrica pH 2,3 (glicina 0,05 14,
CíNa 0,15 14). Recoger tracciones de aproximadamente 2 mi, sobre
tubos con 50 ul de tampón Tris 3M pH 8.
h) - Leer la D.O.a 280 mii de las fracciones eluidas, calculando la
cantidad de inmunoglobulinas retenidas.
i) — Equilibrar la columna con tampón P.B,S.—azida sódica al 0.02%,
hasta pH 7,2 y conservar así a 4QC hasta su uso.
3.2.19.7.- AISLAMIENTO DE LAS INHUNOGIOBUISINAS IgG DEL SUERO
ANTI—IDIOTIPICO MEDIANTE COLUMNA DE PROTEíNA A—SEPHAROSA 4E
a) — Pesar 1,5 g. de Proteina A—Sepharosa 4B y colocar en un vaso
de precipitados con 15 ml de tampón P.B.S. al menos durante 15
minutos.
b) - Traspasar el gel a la columna, colocando placa porosa en el fondo
para evitar su pérdida.
c) — Dejar bajar el líquido y añadir, antes de que se seque, tampón
T.H.S. (Tris 0,05 14—CíNa 0,1 14 pH 8,6). equilibrando hasta que el
pH de salida sea 8,6.
d) — Lavar la columna con 20 ml de tampón T.B.S. pH 8,6 y conservar a
490 hasta su uso.
e) - Preparar la muestra, suero policlonal de conejo, filtrando por
0.45 um y ajustar el PH con NaOH a 8.6.
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