CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

f) - Aplicar la muestra sobre el gel, rellenar con tampón T.B.S. y
mantener en agitación rotatoria toda la noche a 496.
g) - Recoger el filtrado comprobando la actividad del mismo.
h) — Lavar con tampón T.B.S. para eliminar bien lo no unido a la
Proteína A, hasta que la DO. coincida con la del T.B.S.
i) - Preparar los tubos con 50 ul de tampón Tris 3M pH 8.
j) — Eluir la columna con glicina—clorhídrica (glicina 0,05 14,
CíNa 0,15 M) pH 2,3, recogiendo fracciones de 2 mí/tubo.
k) — Leer la D.C. en cada tubo a 280 mii.
1) — Mezclar los tubos correspondientes al pico de absorbancía y dia-
lizar a 490 y toda la noche frente a tampón P.B.S. 2x, dos horas
frente a tampón P.B.S. l.5x y toda la noche frente a tampón
P.B.S. lx. Fraccionar en alícuotas y congelar.
m) - Equilibrar la columna, lavándola con tampón P.B.S.-azida al
0,02% y conservar a 496 hasta su uso.
3 . 2. 20 . - CARACTF.RIZACION DE LOS ANTICUERPOS ANTI—IDIOTIPO
3.2.20.1.— ESTIJI>IO DE LA ACTIVIDAD ANTI—ISOTIPICA
Para determinar la ausencia de actividad anti—isotípica se realizó un
E.L.I.S.A. frente a inmunoglobulinas de ratón: las placas se tapizaron
durante toda la noche a 490 con 100 ul/pocillo de inniunoglobulinas de ra-
tón diluidas en tampón carbonato pH 9,6, a 5 ug/ml. Tras el postapizado con
B.S.A. al 1% durante dos horas a 3796, se añadieron 100 ul de distintas
diluciones del suero anti—idiotípico en P.B.S.—Tween 20, B.S.A. al 0,1%,
incubando dos horas a temperatura ambiente. La reacción se reveló añadiendo
100 ul/pocillo de inmunoglobulinas de cabra anti—inmunoglobulinas de conejo
marcadas con peroxidasa y diluidas en P.B.S.—Tween 20, B.S.A. al 0,1%,
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