CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

Nota: Una porción de la placa se utilizó como control de B.S.A., es
decir, simultáneamente se realizó un control de E.L.I.S.A. sin tapizar con
el suero de conejo anti—Toxocara, para asegurar que la reaccion
colorimétrica era debida a la formación del complejo
anticuerpo—inmunocomplejo y no a reacciones inespecíficas.
Para la interpretación de los resultados, como en el caso de la deter-
minación de anticuerpos específicos, se utiliza el Indice D.O. proble—
ma/D.O. testigo (1 D.O.p/D.O.t), descrito anteriormente.
3.2.18.3.- DETECCION DEL ANTICUERPO MONOCLONAL TC-1 EN SUERO DE
CONEJO.
Para la detección del anticuerpo monoclonal TC-1 (origen murino) cir-
culante en el suero de conejos, se utilizó un E.L.I.S.A. “sandwich” cuyo
fundamento es el siguiente:
a) - Tapizado o sensibilizado. Fijación de inniunoglobulinas de cabra
anti-imnunoglobulinas de ratón a 5 ug/ml en tampón carbonato 0,1
N, pH 9,6. Dejar actuar toda la noche a 490, tras la adición de
100 ul/pocillo.
Lavar tres veces con P.R.S.—Tween 20 para eliminar los anticuer-
pos mal fijados y los no fijados a la placa.
b) - Postapizado. Añadir 250 ul/pocillo de B.S.A. al 0,1% en P.B.S. e
incubar una hora a 3720.
Lavar tres veces con P.B.S.—Tween 20 para eliminar los restos de
B.S.A..
c) — Adición del suero. Añadir 100 ul/pocillo de los sueros a ensayar
a la dilución 1/50 y del control positivo (T0—1) a 2,5 ng/ml en
P.B.S.—Tween 20, B.S.A. al 0,1% y dejar actuar dos horas a 3790.
El anticuerpo monoclonal TC—1 presente en el suero de conejo será
reconocido por las anti-ínmunoglobulinas de ratón.
205