Pathologica 4-07.pdf - Pacini Editore

PATHOLOGICA 2007;99:93
Diagnosi molecolare dell’amplificazione
dell’oncogene Her-2 in sezioni e array:
efficienza e affidabilità dell’analisi
automatizzata a confronto con la lettura
manuale
D. Di Martino
Carl Zeiss, Milano
Campioni bioptici freschi e già archiviati di tessuto normale
e tumorale di cancro al seno sono stati sottoposti ad analisi
automatizzata al fine di compararne le risultanze analitiche
con precedenti letture effettuate da differenti operatori. Campioni
prelevati dal medesimo paziente sono stati sottoposti
alla valutazione della presenza sia di amplificazioni del gene
Her2/neu su sezioni di 3-5 µm che del suo prodotto di espressione
in array tissutali.
Le sezioni istologiche sono state marcate con le sonde
PathVision Vysis in grado di marcare contemporaneamente e
con differenti colori il gene Her2 e il CEP17. Al fine di effettuare
i conteggi dei segnali ottenuti e stabilire la possibile
overespressione genica è stato utilizzato il sistema di analisi
automatizzato Metafer MetaSystems GmbH. I gruppi di nuclei
marcati in fluorescenza sono stati catturati con l’impiego
di un microscopio Carl Zeiss e analizzati applicando degli algoritmi
specificamente sviluppati per la valutazione della
qualità dei segnali e del relativo rapporto Her2/CEP17 da utilizzare
come indice diagnostico. Le porzioni di tessuto orga-
La parola alle industrie
nizzate in Tissue Micro Array sono state, invece, sottoposte a
colorazioni immunoistochimiche ed analizzate in luce
trasmessa per la determinazione del segnale di membrana
rivelato tramite DAB.
La combinazione di ottiche corrette all’infinito, percorsi ottici
perfezionati, acquisizioni ad alta risoluzione e algoritmi
appositamente sviluppati per la determinazione e quantizzazione
delle marcature in fluorescenza e immunoistochimica
hanno offerto risultati che mostrano una soddisfacente
correlazione tra analisi automatizzata e manuale. Soltanto
pochi casi < 3% di campioni amplificati hanno mostrato una
minima differenza di 0,1-0,4 unità relative nel rapporto tra
Her2 e CEP17; differenze che non hanno influenzato l’output
diagnostico e che si possono paragonare alla discordanza tra
le valutazioni di due diversi operatori.
Il presente studio dimostra, dunque, come un’accurata
indagine supportata da opportuni strumenti automatizzati
quali il Metafer possa essere considerata tanto affidabile
quanto uno scoring manuale, consentendo di ritenere tale
strumentazione un nuovo mezzo da impiegare per dirigersi
verso un’analisi più oggettiva dell’espressione di Her2.
Bibliografia
1 Piper J, Loerch T, Poole I, et al. Computing the Her-2:CEP-17 ratio
of tumour cells in breast cancer tissue sections by analysis of the FI-
SH spot count of a tiles sampling. Proc Quant Mol Cytogen 2002.
2 Tuziak T, Olszewski WP, Olszewski W, Pienkowski T. Expression of
HER2/neu in primary and metastatic breast cancer. Pol J Pathol
2001;52:21-6.