Pathologica 4-07.pdf - Pacini Editore

PATHOLOGICA 2007;99:272-276
Flow cytometric analysis of dna ploidy using
oral scrapings of potentially malignant oral
lesions
A. Demurtas * , I. Rostan ** , A. Marsico ** , M. Pentenero, S.
Gandolfo, R. Navone **
Department of Biomedical Sciences and Human Oncology;
Oral Medicine Section and * Pathology Section, University of
Turin, Italy; ** UOADU Pathology 2, ASO “S. Giovanni Battista”,
Turin, Italy
Introduction. Survival rate for oral squamous carcinoma is
not only lower than that of the more common tumours but,
above all, has not improved over the last 25 years, as it is often
diagnosed in advanced stages. Late diagnosis may depend
on the diagnostic difficulty: indeed, the variability of
the histological diagnosis of dysplasia on oral squamous lesions
is higher than in other sites. Moreover, the histo-cytological
findings of oral dysplasia indicate no more that a lesion
has an increased risk of malignant change, but this cannot
used for confident prediction in any individual case, as
carcinoma can develop from lesions in which epithelial dysplasia
has not been diagnosed in previous biopsies. DNA
content has been reported to be a reliable marker in oral oncology
for both malignant and pre-malignant lesions, but intra-tumoral
ploidy heterogeneity is high (12-45% in squamous
cell carcinoma) suggesting that it is far from easy to
analyse correct DNA content on only one specimen. Therefore,
we propose the application of a sampling technique that
uses a dermatological curette to collect cells representative of
the whole visible lesion. Our study included the comparison
of DNA ploidy results and cytological and histological
(scalpel biopsy) diagnosis in potentially malignant oral lesions
(PML).
Material and methods. Scrapings and scalpel biopsies were
obtained from 211 patients with PML. Of these 151 samples
were considered adequate for flow cytometry. Samples were
conserved using both Thin Prep® vials for cytology and microhistology
and saline for flow cytometry. Cytometric assessment
was performed with the cytofluorimeter FACSCalibur
(Becton Dickinson) and the Cycletest Plus DNA
Reagent Kit. A minimum of 20,000 events were acquired for
each sample; the DNA index (D.I.) was elaborated by Mod-
Fit-Software.
Results. Aneuploidy was found in 17/31 (54.8%) squamous
cell carcinoma, 0/6 (0%) verrucous carcinoma, and 34/114
(29.8%) premalignant lesions: 24/48 (50.0%) dysplastic and
10/66 (15.1%) non-dysplastic lesions. A significant difference
in the aneuploidy rate was linked to the presence of dysplasia
(p = 0.004), irrespective of its grade.
Conclusions. The cell material used for exfoliative cytology
of the oral cavity may be used for further studies. In particular,
the DNA test may provide useful informations in the diagnosis
of oral PML. Should aneuploidy be present in lesions
with no morphological evidence of dysplasia, it may be well
of prognostic value.
Patologia orale
Correlazioni tra citologia esfoliativa e
microistologia del cavo orale: analisi di una
nuova metodica di prelievo
A. Marsico, I. Rostan, P. Burlo ** , M. Pentenero * , S. Gandolfo
* , R. Navone
Dipartimento di Scienze Biomediche ed Oncologia Umana
dell’Università di Torino, Sezione di Anatomia Patologica e
di * Medicina Orale, e ** S.C. Anatomia Patologica 1, ASO
“San Giovanni Battista”, Torino
Introduzione. La sopravvivenza del carcinoma orale (38% a
5 anni in Italia) non è migliorata nell’ultimo ventennio e l’incidenza
(> 500.000 nuovi casi/anno a livello mondiale) è in
aumento anche in Paesi industrializzati (UK, Francia). La
diagnosi tardiva può dipendere da difficoltà diagnostiche: in
particolare, è frequente che il prelievo isto-citopatologico
non sia rappresentativo della lesione. Poiché è noto che carcinomi
possono svilupparsi da lesioni orali potenzialmente
maligne (PML) in cui precedenti biopsie non avevano mostrato
evidenza morfologica di displasia, sarebbe importante
un “campionamento” che interessi tutte le zone sospette,
comprese quelle sinora considerate “a basso rischio”. Scopo
dello studio è l’analisi di un metodo di prelievo innovativo
che, oltre all’esame citologico in “strato sottile” ed all’analisi
della ploidia del DNA, consente l’esame istologico sui microfrustoli
“accidentali” ottenuti con questa metodica, campionando
una superficie molto più ampia di quella ottenibile
con la sola biopsia chirurgica (“scalpel biopsy”).
Metodi. In 138 pazienti affetti da PML orali abbiamo eseguito
un prelievo con una curette dermatologica (AcuDispo
Curette, Acuderm inc.). Il materiale è stato posto parte in
Thin Prep per l’esame citologico e microistologico, parte in
soluzione fisiologica per l’analisi del DNA. Ogni paziente è
stato inoltre sottoposto a biopsia chirurgica della lesione.
Risultati. In 3 casi il materiale per la microistologia non era
adeguato per un giudizio diagnostico. Nei restanti 135 casi la
diagnosi finale è stata di 73 casi positivi per displasia o carcinoma
e 62 negativi. La più alta percentuale di casi positivi
(70/73) è stata fornita dalla microistologia, seguita dalla
“scalpel biopsy” (63/73) e dalla citologia (61/73).
Conclusioni. La curette, rispetto ad altre metodiche, non solo
consente di ottenere una maggiore quantità di cellule degli
strati profondi utilizzabili per l’esame citologico e la ploidia
del DNA, ma permette di ottenere dei microfrustoli utilizzabili
per l’esame istologico. Data la superficie più ampia di
prelievo e la possibilità di prelievi multipli, la sensibilità della
metodica è superiore sia all’esame citologico che alla biopsia
chirurgica tradizionale. La “microistologia” potrebbe
pertanto essere un efficiente test, da affiancare alla citologia
come esame di 1° livello, riservando alla “scalpel biopsy” il
ruolo di esame di 2° livello per i casi positivi o sospetti e per
i casi aneuploidi.