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GCET1 expression in endemic Burkitt
lymphoma. Correlation with EBV status and
IGH mutation pattern
C. Bellan, S. Lazzi, M. Cocco, T. Amato, N. Palummo, G.
De Falco, E. Leucci, S. Mannucci, P. Tosi, M. Piris * , L.
Leoncini
Dipartimento di Patologia Umana ed Oncologia, Università
di Siena, Italy; * Centro Nacional de Investigaciones Oncologicas
(CNIO), Madrid, Spain
Introduction. GCET1 (centerin, serpin A9) is a gene induced
in B cells by CD40-CD40L interaction and suspected
to play an important role in GC-B cell development 1 . Previous
studies have shown that expression of GCET1 is primarily
restricted to GC B-cells (centroblasts and large centrocytes
but not small centrocytes). The normal counterpart of
the neoplastic B cells in Burkitt lymphoma (BL) is still unclear.
Basing on immunoglobulin gene rearrangement studies,
some authors suggest an origin from germinal center B
cells and others from memory B cells 2 . To better clarify the
cells of origin in BL we analysed GCET1 expression on 38
endemic BL, and we correlated its expression with EBV status
and immunoglobulin gene mutation pattern of these cases.
Materials and methods. All cases were classified as eBLs according
to WHO criterias. IHC for GCET1 expression and ISH
for EBERs were performed on consecutive sections according
to the manufacturers. Groups of 5-7 GCET1 positive cells were
taken through LCM. Following overnight digestion, the lysate
was directly used as a template in a semi-nested PCR amplification
for VH gene rearrangements analysis. The PCR products
were subsequently cloned and sequenced in both directions.
Only sequences showing a perfect homology were chosen for
comparison with germline sequences from ImmunoGeneTiCs
database. V H genes were considered mutated if they differed
2% or more from the corresponding germ line sequence.
Results. We found that GCET1 expression was significantly
correlated with EBV status. In fact, of 31 EBV positive eBLs,
29 did not shown evidence of GCET1 expression, while 5 out
of seven EBV negative eBLs actively expressed the gene.
This finding was further supported by the analisys of VH
genes (Tab. I), which highlighted a A9- higher degree of mutation
either between EBV+ and EBV- B cases.
Conclusions. All together these results again suggested that
EBV-positive and EBV-negative BL might originate from
distinct subsets of B cells, pointing to a particular role for the
germinal center reaction in the pathogenesis of these tumors.
The immunoglobulin gene mutation patterns of further single
Tab. I.
Range of Average Antigen
mutations mutation selection
frequency
(mean)
EBV-/A9+ 1-7 1.7 0/5
EBV-/A9- 6-9 2.9 0/2
EBV+/A9+ 7-8 3.1 0/2
EBV+/A9- 5-25 5.1 9/29
GC A9+ and A9- cells will be analysed and compared to that
of BL to confirm the results.
References
1 Frazer JK, et al. Eur J Immunol 2000;30:3039-48.
2 Bellan C, et al. Blood 2005;106:1031-6.
POSTERS
Correlazione nei tumori ovarici tra stato di
metilazione dei geni RASSF1A e BRCA1 e
grado di differenziazione
M. Carosi, G. Chichierchia, E. Vizza * , G. Cutillo * , A. Savarese
** , A. Papatantonakis, A. Marsella *** , L. Perracchio
* , P. Visca, F. Marandino, R. Perrone Donnorso
S.C. Anatomia e Istologia Patologica, Istituto “Regina Elena”,
Roma; * Ginecologia Oncologica, Istituto “Regina Elena”,
Roma; ** Oncologia Medica A, Istituto “Regina Elena”,
Roma; *** Radiologia Istituto “Regina Elena”, Roma
Gli eventi molecolari responsabili della carcinogenesi nell’epitelio
ovario non sono ancora tutti noti e nonostante i miglioramenti
terapeutici e chirurgici la sopravvivenza al termine,
per le pazienti soprattutto con malattia avanzata, resta
piuttosto deludente. Tutto ciò è dovuto principalmente alla
nostra poca abilità nello scoprire i tumori nei loro stati precoci
e pertanto nuove strategie volte ad individuare nuovi
markers debbono essere trovate.
Infatti le neoplasie ovariche includono vari istotipi con caratteristiche
isto-morfologiche differenti e pertanto di difficile
valutazione prognostica. La metilazione del DNA risulta
essere un importante regolatore della trascrizione genica
ed il suo ruolo nella carcinogenesi ha suscitato considerevole
interesse negli ultimi anni nell’ambito dell’insorgenza
di molte neoplasie. Infatti l’ipermetilazione come modificazione
epigenetica che reprime la trascrizione dei geni coinvolti
nella soppressione del tumore è stato ampiamente studiato.
Lo scopo di questo studio è di valutare lo stato di metilazione
del promotore dei geni RASSF1A e BRCA1 in vari tipi e
fasi di tumori epiteliali ovarici per valutare se sia possibile
individuare nuovi markers per i quali ideare nuovi farmaci
che possano interferire con gli eventi evolutivi della cellula
neoplastica, con una maggiore selettività del tumore ed al
tempo stesso una minore tossicità. Nel nostro studio sono stati
analizzati 40 tumori epiteliali ovarici in un range che va dai
cistoadenomi benigni, tumori a basso potenziale di malignità
e carcinomi (10 cistoadenomi; 12 tumori a basso potenziale
di malignità e 18 carcinomi) usando il metodo della metilazione-specifica
PCR.
In considerazione dei dati finora ottenuti si e potuto vedere
che il promotore del gene RASSF1A risulta metilato soprattutto
nei tumori a basso potenziale di malignità e nei carcinomi;
mentre il promotore del gene BRCA1 risulta essere
metilato prevalentemente nei carcinomi.