Pathologica 4-07.pdf - Pacini Editore

POSTERS
Caratterizzazione del gene HER2 nel tumore
della mammella
A. Michelucci, P. Collecchi, S. Gelmini * , C. Orlando * , G.
Bevilacqua, A. Cavazzana
Dipartimento di Oncologia, Divisione di Anatomia Patologica
e di Diagnostica Molecolare ed Ultrastrutturale, Università
di Pisa ed Azienda Ospedaliera Pisana, Pisa; * Dipartimento
di Fisiopatologia Clinica, Università di Firenze ed
Azienda Ospedaliero-Universitaria Careggi, Firenze
Introduzione. Un’iperespressione del recettore di membrana
HER2 è documentata nel 25% dei tumori mammari ed è attribuibile
nel 90% dei casi all’amplificazione del gene che
correla con una prognosi peggiore, ma permette di selezionare
le pazienti da sottoporre a terapia con erceptina. Quest’ultimo
farmaco è un anticorpo monoclonale diretto in modo
specifico contro il recettore. Determinare correttamente lo
stato di HER2 è quindi essenziale; i test comunemente utilizzati
sono l’immunoistochimica per la proteina e l’ibridazione
in situ interfasica per il gene. In questo studio sono stati inoltre
valutati i livelli di mRNA e sono stati correlati con i risultati
ottenuti con le metodiche precedenti.
Metodi. HER2 è stato caratterizzato per i livelli di espressione
trascrizionali e proteici, ma anche per il numero di copie
del gene in 100 tumori mammari sporadici consecutivi. I livelli
di mRNA sono stati valutati con real-time RT-PCR ed i
livelli di proteina mediante IHC; il numero di copie del gene
è stato determinato con la FISH.
Risultati. Confrontando i livelli di mRNA e proteina di
HER2 è emerso che il gruppo 3+ ha un’espressione trascrizionale
più elevata rispetto al gruppo 0-1+. Confrontando poi
i livelli di mRNA con il numero di copie del gene HER2 è
emersa la significativa associazione tra livelli trascrizionali e
amplificazione. È stata evidenziata una buona concordanza
tra i risultati ottenuti con IHC e FISH, ma il livello di espressione
di mRNA correla meglio con lo stato di amplificazione
genica che con l’espressione proteica. Infatti, 2 dei 3 falsi negativi
hanno valori di espressione molto superiori rispetto alla
media di espressione del gruppo 2+ e i 2 casi falsi positivi
hanno valori di espressione molto inferiori rispetto alla media
di espressione del gruppo 3+. I valori medi di espressione
genica sono maggiori di un fattore 100 nel gruppo amplificato
rispetto a quello non, ma la dispersione dei valori all’interno
del gruppo amplificato è molto ampia per cui il
gruppo positivo, e quindi adatto alla terapia con Erceptina, è
eterogeneo per l’espressione genica.
Conclusioni. È stata evidenziata una buona concordanza tra
la tecnica IHC e le tecniche molecolari quali real-time PCR
e FISH; inoltre, i livelli trascrizionali di HER2 potrebbero
rappresentare un ideale complemento alle indagini di inquadramento
prognostico-terapeutico, IHC e FISH, del carcinoma
mammario, in considerazione dell’estrema variabilità dei
valori di mRNA nel gruppo amplificato.
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Expression of lactoferrin MRNA in human
breast cancer cells selected by lasermicrodissection
G. Giuffrè, S. Penco * , A. Simone, V. Barresi, G. Tuccari
Department of Human Pathology, University of Messina,
Italy; * Department of Laboratory Medicine, Medical Genetics
Unit, “Niguarda-Cà Granda” Hospital, Milan, Italy
Introduction. Lactoferrin (Lf), a 80 kDa basic glycoprotein,
is a member of the transferrin family of iron-binding proteins
which is coded by a gene present in the short arm of chromosome
3 (3p); transcription of the Lf gene leads to two
products, Lf and ∆-Lf mRNAs. Multiple functions have been
proposed for Lf, such as iron transport, storage and chelation,
regulation of cell growth, the host defense against bacterial
and viral infections, and modulation of the inflammatory response.
The immunomodulatory activity of Lf seems to play
an antitumoral and antimetastatic role; in fact, an oral administration
of bovine Lf to rodents significantly reduces tumorigenesis
in different organs. Moreover a deregulation of
Lf expression has been documented in vivo and in vitro in
some tumours and the 3p21.3 region is one of the most frequently
lost in various cancers, comprising that of breast. In
order to investigate Lf and ∆-Lf mRNAs expression exclusively
in human breast cancer cells, we have performed a
study utilizing a laser-assisted tissue microdissection procedure
that avoids cellular contamination due to tissue heterogeneity.
Methods. On cryostatic sections of 15 human breast cancers
obtained at surgery and post-fixed with ethanol we applied
laser-microdissection procedure using a Leica AS LMD system
(Leica Microsystems, Germany). From each section
stained with Haematoxilin-Eosin, a variable number of neoplastic
epithelial cells (from 300 to 600) has been harvested
in different PCR tubes. RNA extraction has been performed
by RNeasy Micro Kit (Qiagen); successively, using the 1st
Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (Roche Applied Science),
RNA has been reverse transcribed into single-stranded
cDNA. Finally, cDNA has been amplified utilizing primer
pairs designed for the specific detection of target sequences
of human Lf, its alternative isoform ∆Lf as well as β-actin.
Results. All samples showed expression for β-actin. Sufficient
cDNA for Lf amplification has been obtained starting
from 300 epithelial cells. Lf mRNA has been detected in
14/15 breast cancer samples, with an occasional ∆Lf expression
in 2/15 cases.
Conclusions. The Lf expression by us documented in a selected
cellular population of breast cancer suggests a maintained
quite constant evidence of Lf, although the ∆Lf isoform
appears to be downregulated. Finally, the laser microdissection
may be considered a valid tool to perform a
precise Lf molecular analysis.