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Esiste ancora un ruolo della microscopia
elettronica nella diagnostica delle malattie da
accumulo?
V. Papa, P. Preda, L. Tarantino, L. Badiali De Giorgi, G.N.
Martinelli, G. Cenacchi
Dipartimento Clinico di Scienze Radiologiche e Istocitopatologiche,
Università di Bologna
Introduzione. Le malattie da accumulo sono numerose e
complesse e i meccanismi eziopatogenetici non sono ancora
completamente chiariti 1 . In numerose di esse sono stati
definiti i difetti genetici e la terapia può avvalersi, in alcuni
casi, di molecole sostitutive. La diagnosi precoce risulta, pertanto,
di fondamentale importanza. Scopo del nostro studio è
stato, quindi, quello di rivalutare il ruolo della Microscopia
Elettronica quale strumento di indagine fondamentale nella
diagnosi di tali malattie.
Materiali e metodi. Sono stati studiati mediante microscopia
elettronica a trasmissione 42 casi di malattie da accumulo
(2001-2007) di cui: 18 malattie da accumulo intracitoplasmatico
lisosomiale (Fabry, 5, mucopolisaccaridosi, 1, Niemann-Pick,
2, gangliosidosi, 1, glicogenosi tipo II, 4, Danon,
1, ceroidolipofuscinosi, 4); 4 casi di malattia da accumulo intracitoplasmatico
non lisosomiale (IBM, 1, malattia da
deficit di L-CAT, 1, Lafora, 2) e 20 casi di malattia da accumulo
extracitoplasmatico (CADASIL, 20).
Risultati. I quadri submicroscopici relativi delle singole patologie
mostravano alterazioni degenerative aspecifiche e/o
inclusioni lisosomiali o citoplasmatiche specifiche definite
dai differenti pattern riorganizzativi delle strutture molecolari
accumulate: accumulo di particelle di glicogeno
(glicogenosi), finger prints o GRODs (ceroidolipofuscinosi),
figure mieliniche (malattia di Fabry), strutture filamentosofibrillari
(IBM), GOMs (CADASIL).
Conclusioni. I nostri dati evidenziano come la diagnostica
ultrastrutturale possa essere considerata una metodica di
screening diagnostico altamente sensibile, efficiente, costoeffettiva
e rapida che non può prescindere, tuttavia, dall’esperienza
del patologo nella lettura dei preparati. È assolutamente
necessario, infatti, essere in grado di differenziare alterazioni
aspecifiche/artefattuali da strutture patognomoniche
e, nell’ambito di queste, tra patologie con strutture
morfologiche simili. Nonostante tale metodica sia sicuramente
più costosa rispetto ad analisi di tipo biochimico, in
alcune forme di “malattie da accumulo” quali CADASIL o
alcune varianti di ceroidolipofuscinosi con anomala localizzazione
tissutale 2 , sembra rappresentare la metodica diagnostica
più efficace e sicura.
Bibliografia
1 Johannessen JV. Electron Microscopy. Hum Med 1978;2:159-210.
2 Boldrini, et al. Ultrastruct Pat 2001;25:51-8.
FREE PAPERS
Banca tessuti congelati: come ottenere
tessuto fresco di carcinoma nella
prostatectomia radicale. Proposta di una
procedura sperimentata all’INT di Milano
A. Pellegrinelli, M. Colecchia, N. Zaffaroni, A. Carbone
Dipartimento di Patologia e Struttura Complessa di Ricerca
Traslazionale, IRCCS INT, Milano
Introduzione. Le caratteristiche macroscopiche del carcinoma
prostatico nei campioni di prostatectomia radicale rendono
difficile individuare e prelevare una parte di tumore per
la banca dei tessuti congelati senza compromettere il successivo
esame istologico routinario. I risultati ottenuti mediante
una procedura sperimentale vengono qui confrontati con
quelli ottenuti con altre procedure di prelievo 1 .
Metodi. La procedura prevede i seguenti passaggi:
1. chinare la superficie esterna della prostatectomia, immergerla
per qualche secondo in liquido di Bouin ed asciugare
con garza;
2. eseguire macrosezioni seriate di circa 0,5 cm di spessore,
parallele alla base prostatica ed esaminarle cercando di individuare
le aree sospette (aree di consistenza aumentata
rispetto al parenchima circostante, aree di colore giallastro,
aree che deformano il profilo periferico della capsula prostatica
o il parenchima circostante ecc.). In questo passaggio
può essere di aiuto conoscere il risultato del mapping
bioptico eventualmente eseguito pre-operatoriamente in riferimento
alla sede ed alla quantità di carcinoma;
3. asportare con bisturi una parte dell’area sospetta (con tecnica
tipo shave per le lesioni cutanee), ottenendo un frammento
tessutale di circa 1 cm x 1 cm x 0,2 cm, senza intaccare
la superficie esterna in china;
4.congelare i frammenti asportati, eseguire una Ematossilina-Eosina
(E.E.) (eventualmente da archiviare con le altre
E.E, del caso) e conservare il tessuto congelato a -80
gradi.
5. stendere su supporti di sughero (numerati e con indicazioni
dx e sx) le macrosezioni mediante il posizionamento di
spilli nella zona periferica, tendendole e sollevandole dal
piano del sughero e lasciare a fissare in formalina per almeno
12 ore. Procedere quindi con il campionamento indicando
sui blocchetti il lato (dx o sx) e la sede del prelievo
(anteriore, posteriore, base, ecc.).
Risultati. La procedura è stata eseguita su una serie di 38
prostatectomie consecutive, prelevando un totale di 54 frammenti
da aree ritenute sospette. Dopo l’esame della EE ottenuta,
il 90% conteneva carcinoma.
Conclusioni. La sensibilità (90%) di questa procedura è
sovrapponibile a quella ottenuta mediante biopsie multiple
esterne (83,3%) 1 e l’esame istologico routinario non è stato
compromesso in nessuno delle 38 prostatectomie. I vantaggi
sono la possibilità di ottenere quantità superiori di carcinoma
rispetto alla procedura bioptica e la possibilità di esaminare
con più accuratezza l’architettura della neoplasia disponendo
di sezioni più ampie e rappresentative (circa cm 1 x 1) rispetto
a quelle bioptiche.
Bibliografia
1 Walton TJ, et al. The Prostate 2005;64:382-6.