Effet chez le porcelet d'une exposition à un régime co-contaminé en ...

TRAVAIL EXPERIMENTAL2) Plan expérimental de la phase animale et prélèvement des échantillons (Figure 15)Toutes les procédures d’expérimentations animales ont été menées en accord avec lesrecommandations européennes au regard de l’utilisation des animaux à des fins de recherches(Directive 86/609/EEC). Des porcelets mâles castrés (Pietrain X Duroc X Large-white) et sevrés ont étéobtenus dans un élevage local, et familiarisés à leur nouvel environnement les dix jours précédents ledébut de la phase expérimentale. Des lots homogènes basés sur le poids des animaux ont ensuite étéformés. Pendant les 35 jours de l’expérience, les porcelets ont eu libre accès à l’eau et au régimealimentaire désigné. Une surveillance quotidienne, ainsi qu’une pesée hebdomadaire, ont étéréalisées au cours de cette période. Les phases d’expérimentations animales avec les aliments nonsupplémentés et les aliments supplémentés en DA ont été menées simultanément.Afin de stimuler et d’étudier la réponse immunitaire, deux injections contenant une solutiond’ovalbumine mélangée à l’adjuvant incomplet de Freund, ont été administrées à 12 joursd’intervalle (J4 et J16 de la période expérimentale) à tous les animaux.Des prélèvements sanguins à la veine jugulaire ont été effectués chaque semaine pour la mise enculture du sang total et pour la récupération du plasma (stocké à -20°C).Après les 35 jours d’expositions aux différents régimes, tous les animaux ont été sacrifiés parexsanguination après électronarcose. Des échantillons de foie, poumons, rate et des sectionsd’intestin ont été prélevés et fixés dans un tampon de formaldéhyde à 10% pour les analyseshistologiques. De plus, des échantillons de rate ont été directement congelés dans l’azote liquide,puis stockés à -70°C avant leurs traitements pour les analyses transcriptomiques.3) Analyses hématologiques et biochimiquesL’analyse hématologique a été effectuée dans un laboratoire d’analyses médicales (Ferrandery,Tournefeuille, France) via l’utilisation d’un automate à impédance, Coulter LH500 (Beckman Coulter,Villepinte, France). La sous-population des globules blancs (lymphocytes, neutrophiles, monocytes,basophiles et éosinophiles) a été étudiée et comptée manuellement sur 100 leucocytes par lacoloration de May-Grünwald Giemsa.Les concentrations plasmatiques de l’albumine, des protéines totales, de l’urée, de la créatinine,du cholestérol, des triglycérides et de la gamma-glutamyl transférase, ont été déterminées à l’EcoleNationale Vétérinaire de Toulouse via l’utilisation d’un automate, Vitros 250 (Ortho ClinicalDiagnostics, Issy les Moulineaux, France).145