Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

A
B
OD600
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 10 20 30
t in h
Ydr384cp-HA(1)
Ydr384cp-HA(2)
0h 12h 14h 16h 18h 20h 22h 24h
Ergebnisse
Abb. 30: Expression des mit dem HA-Tag fusionierten Ydr384cp im Stamm YN während
des Wachstums der Transformanden in Minimalmedium mit Glucose. Die Vorkulturen
wurden üN in MG-Flüssigmedium geschüttelt, einmal mit 1 x Readersalzen
gewaschen und die Hauptkulturen mit unterschiedlichen OD600 (1: OD600 = 0,7/ 2:
OD600 = 1,4) angeimpft. Zu den angegebenen Zeitpunkten wurden jeweils 50 ml
Kultur entnommen, die Zellen abzentrifugiert und aufgeschlossen. In A) sind die
Wachstumskurven und in B) die entwickelten Western-Blots mit den Ponceau-S
gefärbten Membranen dargestellt. Die Pfeile markieren den Zeitpunkt, an dem
keine Glucose mehr im Medium nachweisbar war.
3.3.13.2 Expression in Minimalmedium mit verschiedenen C-Quellen
YN/p416YDR-HA(1)
YN/p416YDR-HA(2)
Zeitpunkt, ab dem
keine Glucose im Medium
nachweisbar war
Weiterhin sollte die Induktion der Expression der Homologen durch ausgewählte C-Quellen
untersucht werden. Zu diesem Zeitpunkt waren Acetat und Ethanol als Hauptinduktoren für
die GPR1-Expression bekannt (Augstein, 2001), deshalb wurde die Expression, neben Minimalmedium
ohne C-Quelle, auf diesen beiden C-Quellen untersucht.
Der Stamm YN wurde 4 h auf Minimalmedium mit Glucose kultiviert, welche die Expression
der Homologen reprimiert. Danach wurden die Zellen in Minimalmedium mit unterschiedlichen
C-Quellen umgesetzt. Die Ergebnisse der Northern-Blots sind in Abb. 31 dargestellt.
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