Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

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Inhaltsverzeichnis 3.3.16.2 Einfluss der dominanten Mutationen in Ycr010cp und Ynr002cp auf die Produktion von Ammonium ........................................................ 107 4 Diskussion...............................................................................................112 4.1 Datenbankanalyse von Gpr1p und dessen Orthologen in Saccharomyces cerevisiae.............................................................................................................. 112 4.2 Identifizierung möglicher Interaktionspartner von Gpr1p ...................................... 115 4.3 Expression der Mutantenallele von GPR1 und dessen Orthologen in Saccharomyces cerevisiae ................................................................................... 117 4.4 Ort-spezifische und zufällige Mutagenese von Gpr1p in Yarrowia lipolytica und dessen Orthologen in Saccharomyces cerevisiae ................................................ 119 4.5 Sequenzanalyse und Regulation der Promotoren der GPR1-Orthologen ............ 122 4.6 Auftreten der drei Gpr1p-Orthologen in unterschiedlichen Formen ...................... 125 4.7 Expression in Minimalmedium mit verschiedenen Essigsäurekonzentrationen.... 126 4.8 Bestimmung von sekretiertem Ammonium ........................................................... 127 4.9 Mögliche Funktionen der Gpr1p-Orthologen......................................................... 131 5 Zusammenfassung .................................................................................135 6 Literatur ...................................................................................................138 7 Anlagen....................................................................................................150 7.1 Plasmidkarten ....................................................................................................... 150 7.2 Topologiemodelle der Gpr1p-Orthologen in Saccharomyces cerevisiae.............. 152 7.3 Potentielle Modifizierungsorte der Gpr1p-Orthologen in Saccharomyces cerevisiae.............................................................................................................. 153 IV
Abkürzungsverzeichnis Abkürzungsverzeichnis A Acetat Abb. Abbildung AK Antikörper ATP Adenosintriphosphat BSA bovine serum albumin (Rinderserumalbumin) bp Basenpaare cpm counts per minute (detektierte Zerfallserscheinungen pro Minute) C-Quelle Kohlenstoffquelle CYC1 Cytochrom c, Isoform 1 ddH2O doppelt destilliertes Wasser DEPC Diethylpyrocarbonat dH2O destilliertes Wasser DTT Dithiothreitol EDTA Ethylendiamintetraessigsäure EtOH Ethanol 5-FOA 5-Fluor-Orothsäure G Glucose GPR1-1 GPR1-Allel aus dem Y. lipolytica-Stamm B204-12C-112 GPR1-2 GPR1-Allel aus dem Y. lipolytica-Stamm B204-12C-156 kDa Kilodalton HA Hämagglutinin-Epitop (abgeleitet aus dem Influenza HA-Protein) lacZ Gen der β-Galactosidase aus E. coli LB Luria Bertani λ-PPase λ-Phosphatase M Minimalmedium für S. cerevisiae MES 2-Morpholinoethansulfonsäure MM Minimalmedium für Y. lipolytica OD600 optische Dichte bei 600 nm OEP overlap extension PCR ORF open reading frame (offener Leserahmen) PAGE Polyacrylamid-Gelelektrophorese PCR polymerase chain reaction (Polymerasekettenreaktion) PVDF Polyvinylidenfluorid RT Raumtemperatur SDS Natriumdodecylsulfat V
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Material und Methoden Es wurden 4%i
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Material und Methoden 1 x Readersal
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Ergebnisse Tab. 12: Homologe Protei
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Ergebnisse Mit Hilfe verschiedener,
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Potentielle Modifizierungsorte und
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Ergebnisse tiert. Deshalb wurde zue
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3.2.3 Wachstum verschiedener Yarrow
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-488 AAGTTCTTGA CTACCCCTAT CTCACACT
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Ergebnisse In den meisten eukaryoti
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Ergebnisse Der YNR002c-Promotor zei
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Ergebnisse Abb. 24: Expression der
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Ergebnisse detektierten Banden um d
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Ergebnisse Die Ergebnisse des North
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Ergebnisse nur eine sehr schwache E
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A B OD600 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 10 20
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Ycr010cp-HA Ydr384cp-HA Ynr002cp-HA
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Ergebnisse 3.3.13.4 Expression in M
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Ergebnisse für die Zellen toxisch.
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W303 W303Δmsn2Δmsn4 W303Δgis1 18
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A B K1 K2 K3 K1 K2 K3 Ergebnisse a
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Ergebnisse wiesen in dieser Größe
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Ammoniumsekrteion in mg*ml-1*min-1
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Ammoniumsekretion in mg*ml-1*min-1
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Ergebnisse Die Transformanden des S
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Diskussion chungen wurden verschied
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4.9 Mögliche Funktionen der Gpr1p-
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Zusammenfassung fügung, so ist die
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Literatur implications for 14-3-3 b
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Literatur Gasch AP (2002) Yeast gen
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Literatur Kubota H, Sakaki Y and It
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Literatur Oshima Y (1982) Regulator
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Literatur Sikkema J, de Bont JA and
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Literatur tanoic acid-supplemented
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Amp r Amp r Amp r SacII, 3404 4000
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Anlagen Tab. 22: Verschiedene Topol
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Potentielle Modifizierungsorte und
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