Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
Der Stamm PO1d ist Leucin-auxotroph, was zu einem schlechteren Wachstum in Minimalmedium
führt. Das Plasmid pINA237 enthält das LEU2-Markergen, das die Leucin-
Auxotrophie aufhebt und ein besseres Wachstum zur Folge hat. Dies sollte im folgenden
Versuch überprüft werden. Es wurde das Wachstum der Stämme PO1d/pINA237,
PO1dΔgpr1/pINA237 und PO1dΔgpr1/pYLG3 auf Medium mit verschiedenen C-Quellen getestet
(Abb. 13).
PO1d/pINA237
PO1dΔgpr1/pINA237
PO1dΔgpr1/pYLG3
PO1d/pINA237
PO1dΔgpr1/pINA237
PO1dΔgpr1/pYLG3
Glucose, 3d Glycerin, 3d
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
Acetat, 6d Acetat/Glycerin, 4d
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1) 1 x 101 Zellen
2) 1 x 102 Zellen
3) 1 x 103 Zellen
4) 1 x 104 Zellen
5) 1 x 105 1) 1 x 10
Zellen
1 Zellen
2) 1 x 102 Zellen
3) 1 x 103 Zellen
4) 1 x 104 Zellen
5) 1 x 105 Zellen
Abb. 13: Vergleich des Wachstums von PO1d- und PO1dΔgpr1-Transformanden auf Minimalmedien
mit verschiedenen C-Quellen. Die Zellzahl der üN in Minimalmedium mit
Glucose kultivierten Transformanden wurde bestimmt und die angegebenen Zellmengen
auf die Platten getropft.
Alle getesteten Stämme wuchsen auf Minimalmedium mit Glucose bzw. Glycerin gleich gut.
Enthielt das Minimalmedium Acetat als C-Quelle, so wuchsen die Stämme etwas schlechter,
aber es waren keine Wachstumsunterschiede zwischen ihnen zu erkennen. Wurde den Minimalmediumplatten
Acetat/Glycerin als C-Quellen zugesetzt, so wuchsen die Stämme
PO1dΔgpr1/pINA237 und PO1dΔgpr1/pYLG3 besser als der Stamm PO1d/pINA237.
Die Deletion von GPR1 im Stamm PO1dΔgpr1 führte dazu, dass dieser Stamm im Gegen-
satz zum Wildtyp in der Lage war, auf Minimalmedium mit Acetat/Glycerin als C-Quellen zu
wachsen. Dieser Effekt konnte durch die Transformation des Plasmides pYLG3, das das
GPR1-Allel trägt, nicht kompensiert werden. Der Phänotyp von PO1dΔgpr1 ist somit nicht
direkt auf die Deletion von GPR1 zurückzuführen. Möglicherweise erzeugte die GPR1-
Deletion sekundäre Effekte, die irreversibel sein müssen.
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