Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
für die Zellen toxisch. Stand allerdings neben Acetat noch Glucose als C-Quelle zur Verfügung,
so hatten die getesteten Acetatkonzentrationen keinen toxischen Effekt auf die Zellen.
3.3.13.5 Expression der Homologen unter Stress
Bei der Kultivierung auf Minimalmedium mit unterschiedlichen C-Quellen zeigte sich, dass
die Gpr1p-Orthologen auf Medium ohne C-Quelle ebenfalls exprimiert wurden. Unter diesen
Bedingungen sind die Zellen Stress ausgesetzt, es stellte sich somit die Frage, ob eine Expression
allein durch Stress hervorgerufen werden kann.
Für diese Untersuchungen wurden die Stämme W303, W303Δgis1 und W303Δmsn2Δmsn4
ausgewählt. In diesen Stämmen war GIS1 bzw. MSN2 und MSN4 deletiert. W303 war der
entsprechende Wildtypstamm zu diesen Mutantenstämmen.
Der Transkriptionsfaktor Gis1p ist notwendig, wenn eine Nährstofflimitation eintritt. Er induziert
während des diauxischen Shifts Gene, die für das Überleben der Zelle benötigt werden
(Pedruzzi et al., 2000). Msn2p und Msn4p spielen als Transkriptionsfaktoren während verschiedener
Stressbedingungen eine Rolle (z. B. Osmostress, oxidativer Stress, N-Mangel,
schwache organische Säuren, hoher pH-Wert, Ethanol). Sie binden an STREs (stress
responsive element), deren Erkennungssequenzen im 5´-upstream-Bereich von Genen liegen
(Martinez-Pastor et al., 1996).
Abb. 36, Abb. 37 und Abb. 38 zeigen die Ergebnisse der Northern-Blots. In Tab. 20 sind die
Expressionsstärken der Homologen auf den verschiedenen C-Quellen zusammengefasst.
Aus dieser Tabelle ist zu entnehmen, dass die Expression von YCR010c auf Minimalmedium
mit Acetat bzw. ohne C-Quelle im Stamm W303Δmsn2Δmsn4 niedriger war als im Aus-
gangsstamm W303. Weiterhin verringerte sich die Expressionsstärke von YDR384c auf Mi-
nimalmedium mit Acetat als C-Quelle. Im Stamm W303Δgis1 kam es mit Ethanol als
C-Quelle zur Erhöhung der Expressionsstärke. Auf Minimalmedium mit Ethanol bzw. ohne
C-Quelle war die Expression von YDR384c geringer als im Wildtypstamm W303. Diese Daten
weisen darauf hin, dass YCR010c und YDR384c durch Stress reguliert werden. Die Regulation
von YNR002c ist dagegen Stress-unabhängig.
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