Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
Diese Möglichkeiten sollten im folgenden Versuch abgeklärt werden. Die Transformanden
wurden auf verschiedenen C-Quellen und unterschiedlichen pH-Werten kultiviert. Die Ergebnisse
des Western-Blots sind in Abb. 33 dargestellt.
Wurden die mit dem HA-Tag fusionierten Homologen auf Minimalmedium mit Glucose, Ethanol
oder ohne C-Quelle kultiviert, so konnten keine Unterschiede in deren Expression festgestellt
werden. Somit hat der pH-Wert keinen Einfluss auf die Expression. Bei der Kultivierung
auf Acetat als C-Quelle mit verschiedenen pH-Werten des Minimalmediums gab es allerdings
Unterschiede in deren Expression. Je niedriger der pH-Wert des Mediums war, desto
niedriger fiel auch die Expression der drei Homologen aus. Dabei wird die Expression von
Ydr384cp-HA weniger durch niedrigeren pH-Wert beeinflusst als die Expression von
Ycr010cp und Ynr002cp.
Glucose
2h 3h 2h 3h 2h 3h
Ycr010cp-HA
Ydr384cp-HA
Ynr002cp-HA
Ycr010cp-HA
Ydr384cp-HA
Ynr002cp-HA
pH4,0 pH5,5 pH6,0
Ethanol
pH4,0 pH5,5 pH6,0
2h 3h 2h 3h 2h 3h
Ycr010cp-HA
Ydr384cp-HA
Ynr002cp-HA
Ycr010cp-HA
Ydr384cp-HA
Ynr002cp-HA
Acetat
pH4,0 pH5,5 pH6,0
2h 3h 2h 3h 2h 3h
ohne C-Quelle
pH4,0 pH5,5 pH6,0
2h 3h 2h 3h 2h 3h
Abb. 33: Expression der mit dem HA-Tag fusionierten Homologen Ycr010cp, Ydr384cp
und Ynr002cp im Stamm YN in Abhängigkeit vom pH-Wert des Mediums. Die
Vorkulturen wurden üN in MG-Flüssigmedium geschüttelt, einmal mit 1 x Readersalzen
gewaschen und von diesen die Hauptkultur mit einer OD600 von ca. 2 angeimpft.
Es erfolgte eine Kultivierung auf verschiedenen C-Quellen (Glucose,
Acetat, Ethanol) und ohne C-Quelle sowie unterschiedlichen pH-Werten
(pH = 4,0, 5,5 oder 6,0) des Mediums. Zu den angegebenen Zeitpunkten wurden
jeweils 50 ml Kultur entnommen, die Zellen abzentrifugiert und aufgeschlossen.
Die Abbildung zeigt die entwickelten Western-Blots mit den Ponceau-S gefärbten
PVDF-Membranen.
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