Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
Der YNR002c-Promotor zeigte auf den verschiedenen N-Quellen Ammoniumsulfat, Glutamat
und Prolin die gleiche Zunahme der β-Galactosidaseaktivität, somit war die Induktion auf
allen drei N-Quellen gleich. Der an den Nit2p-Bindungsstellen mutierte YNR002c-NIT2-4-
Promotor zeigte mit Ammoniumsulfat oder Glutamat als N-Quelle eine ähnliche Zunahme der
β-Galactosidaseaktivität wie der Ausgangspromotor. Stand den Zellen allerdings nur eine
sekundäre Stickstoffquelle in Form von Prolin zur Verfügung, so wurde die Zunahme der
Aktivität der β-Galactosidase geringer. Dieses Ergebnis deutet darauf hin, dass die mögli-
chen Nit2p-Bindungsstellen im Promotor von YNR002c funktionell sind und dieses Gen während
der Verwertung sekundärer Stickstoffquellen eine Rolle spielen könnte.
3.3.10 Expression von β-Galactosidase unter der Kontrolle der Promotoren
von YCR010c, YDR384c und YNR002c im Vergleich zu GPR1
Creuzburg (2002) und Dillschneider (2003) untersuchten in ihren Arbeiten die Regulation der
Promotoren von YCR010c, YDR384c und YNR002c durch verschiedene C-Quellen mittels
lacZ-Reportergenanalysen. In Y. lipolytica wurde von Augstein (2001) auf diese Weise ebenfalls
die Regulation des GPR1B-Promotors aus dem Stamm PO1d getestet. In Abb. 23 sind
die erhaltenen Ergebnisse miteinander verglichen.
β-Galactosidaseaktivität in MU
350
300
250
200
150
100
50
0
ohne C-Quelle
Glucose
Glycerol
Acetat
Acetat/ Glucose
Ethanol
Ethanol/ Glucose
Ölsäure
Lactat
pGPR1
pYCR010c
pYDR384c
pYNR002c
Abb. 23: Expression des LacZ-Gens unter Kontrolle des GPR1B-Promotors in Y. lipolytica
(PO1d) und des YCR010c-, YDR384c- bzw. YNR002c-Promotors in S. cerevisiae
(YN) in Abhängigkeit von der C-Quelle im Medium. Es wurde jeweils die Maximalexpression
nach 4,5 – 10 h Kultivierung dargestellt (Creuzburg, 2002;
Dillschneider, 2003).
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