Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

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Ergebnisse Die Promotorregion von YCR010c enthält eine mögliche Bindungsstelle für Pho4p. Dieser Transkriptionsfaktor ist unter Phosphat-Mangelbedingungen dephosphoryliert und damit aktiv (Springer et al., 2003). In allen drei Promotoren konnten mehrere NIT2-Motive identifiziert werden, die auf eine Stickstoff-abhängige Regulierung hinweisen. Das Nit2p aus N. crassa ist ein positiver Regulator und aktiviert Gene, die bei der Verwertung sekundärer N-Quellen benötigt werden (Chiang et al., 1994; Chiang and Marzluf, 1995). Der Promotor von YCR010c weist zwei Bindungsstellen für den Repressor von CAR1 (REPCAR1-Motiv) auf. Das CAR1-Gen codiert für Arginase, die für den Abbau von Arginin verantwortlich ist (Cooper et al., 1992). Die Expression von CAR1 wird durch Arginin und unter N-Mangel induziert (Smart et al., 1996). Das Gcn4-Protein ist in die Regulation von Genen der Aminosäurebiosynthese involviert (Sosa et al., 2003). Eine potentielle Bindungsstelle für dieses Protein konnte im YDR384c- Promotor identifiziert werden, dessen Regulation Gcn4p abhängig ist (Guaragnella and Butow, 2003). In allen drei Promotoren befinden sich STRE-Elemente (stress response element; Schüller et al., 2004). Weiterhin konnten im YDR384c- und YNR002c-Promotor Bindungsstellen für Hitzeschutzfaktoren (YDR384c: HSF2/5, YNR002c: HSF5) nachgewiesen werden (Fernandes et al., 1994). Somit könnte die Regulation der drei Homologen Stress-abhängig sein. Der Transkriptionsaktivator Ste11p ist in Schizosaccharomyces pombe für die sexuelle Entwicklung notwendig (Sugimoto et al., 1991) und wird unter Nährstoffmangel induziert (Kunitomo et al., 2000). Die Promotoren von Ydr384c und YNR002c enthalten mögliche Bindungsstellen für dieses Protein. In den Promotoren von YDR384c und YNR002c konnte ein Bindemotiv für Abf1p nachgewiesen werden. Dieser Transkriptionsfaktor ist in einer Vielzahl von Prozessen im Kern involviert, wie z. B. der DNA-Replikation, Transkriptionsaktivierung und Stilllegung von Genen (Marahrens and Stillman, 1992; Miyake et al., 2004). Der Transkriptionsfaktor AbaAp aus A. nidulans spielt während der Entwicklung der Konidiophore in der Chitin-Biosynthese eine Rolle, indem er den Level von Chitin-Synthase-Genen reguliert (Andrianopoulos and Timberlake, 1994; Park et al., 2003). In den Promotoren von YDR384c und YNR002c konnten für AbaAp Bindungsstellen identifiziert werden. Das Genom von A. nidulans codiert weiterhin für das StuA-Protein, das ebenfalls in der asexuellen Vermehrung (Konidienbildung) involviert ist (Dutton et al., 1997; Wu and Miller, 1997). Mögliche DNA-Bindemotive für dieses Protein konnten im Ycr010c- und YNR002c-Promotor identifiziert werden. 80
Ergebnisse In den meisten eukaryotischen Promotoren ist ein Hap2/3/4/5-Motiv (CCAAT) präsent (Mantovani, 1998; Serra et al., 1998). Dieses Motiv enthalten jedoch nur die Promotoren von YCR010c und YNR002c. Im YDR384c-Promotor konnte ein potentielles Bindemotiv für Mcm1p (Minichromosome Maintenance) nachgewiesen werden, dieses Protein ist für die effiziente Replikation von Minichromosomen notwendig. Mcm1p ist an den Replikationsstartpunkten lokalisiert und spielt in der Initiation der DNA-Replikation eine wichtige Rolle (Chang et al., 2003). In der SGD 1 sind Microarray-Daten einsehbar, welche die RNA-Expression aller Gene aus S. cerevisiae unter verschiedenen Kultivierungsbedingungen enthalten. In Tab. 19 sind die Expression der GPR1-Orthologen unter ausgewählten Bedingungen zusammengefasst. Es wurden die RNA-Expressionen unter Stressbedingungen, auf verschiedenen C-Quellen sowie N-Quellen dargestellt. Tab. 19: Regulation der Promotoren YCR010c, YDR384c und YNR002c, die in der Tabelle aufgeführten Daten stammen aus Microarrays, die in der „Saccharomyces Genome Database“ 1 eingesehen werden können. Rot bedeutet eine Induktion der Expression, grün steht dagegen für eine Repression. YCR010c YDR384c YNR002c Stressbe- Hitzeschock Hitzeschock (30 min) Hitzeschock dingungen diauxischer Shift diauxischer Shift diauxischer Shift YPD stat. Phase ab 5 h spätere stat. Phase stat. Phase Ethanol Ethanol Ethanol H2O2 (gering) H2O2 H2O2 (ganz gering) msn2msn4 + H2O2 (ganz msn2msn4 + H2O2 - gering) Kälteschock Kälteschock Kälteschock (ganz gering) Sobitol (gering) - - DTT DTT DTT hypoosm. Shock hypoosm. Schock hypoosm. Schock Beginn stat. Phase Beginn stat. Phase - YAP1 Überexpression YAP1 Überexpression - C-Quelle Galactose Galactose - Glucose Glucose (gering) Glucose Mannose Mannose Mannose Raffinose Raffinose (sehr gering) - Sucrose - Sucrose (gering) Fructose Fructose - N-Quelle - Diamid Diamid - AS-Mangel bis 0,5 h - N-Mangel N-Mangel 1 http://www.yeastgenome.org/ 81
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1 Einleitung 1.1 Stressantwort von
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Einleitung faktoren binden an die G
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Einleitung entgegengesetzt werden.
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Einleitung Foster (2000) stellt in
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Einleitung ATP vermieden (Braley an
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Einleitung lässt den Schluss zu, d
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Einleitung Im Glyoxylatzyklus werde
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Einleitung Acetat und Ethanol induz
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Einleitung Hydrophobizitätsblots d
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Einleitung Die Protonenpumpe wird a
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Einleitung Lactat und Glycerol. Mit
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1.4 Zielstellung der Arbeit Einleit
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2 Material und Methoden 2.1 Geräte
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2.4 Enzyme CombiZyme DNA Polymerase
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Seite 39 und 40: Material und Methoden YNR-Cla-rev A
Seite 41 und 42: 2.7.3 Yarrowia lipolytica Tab. 8: V
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4.9 Mögliche Funktionen der Gpr1p-
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Diskussion Paiva et al. (2004) wies
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Zusammenfassung fügung, so ist die
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Literatur implications for 14-3-3 b
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Literatur Gasch AP (2002) Yeast gen
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Literatur Kubota H, Sakaki Y and It
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Literatur Oshima Y (1982) Regulator
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Literatur Sikkema J, de Bont JA and
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Literatur tanoic acid-supplemented
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Amp r Amp r Amp r SacII, 3404 4000
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Lebenslauf Name: Margret Kuschel Ge
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