Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

A B
K1 K2 K3 K1 K2 K3
Ergebnisse
a b a b a b a b a b a b
Ycr010cp Ycr010cp
Abb. 40: Test der Seren der Kaninchen (K1, K2 und K3) nach 90 Tagen. Die Stämme a)
YN und b) YNΔycrΔydrΔynr wurden üN in MG-Flüssigmedium geschüttelt. Nachdem
die Vorkulturen einmal mit 1 x Readersalzen gewaschen wurden, erfolgte die
Kultivierung in Minimalmedium mit Ethanol als C-Quelle. Die Zellen wurden nach
2 h geerntet und aufgeschlossen. Die Analyse der Zellextrakte erfolgte im Western-Blot.
Der primäre AK (YCR-AK) wurde in einer Verdünnung von 1:2500 eingesetzt.
A) sekundärer AK 1:5000, B) sekundärer AK 1:10000.
Die letzte Probeentnahme der Seren der Kaninchen fand nach 120 Tagen statt, diese wurden
in einem weiteren Western-Blot hinsichtlich ihrer Qualität überprüft (Abb. 41).
K1 K2 K3
a b a b a b
82,2 kDa
63,2 kDa
48,8 kDa
37,1 kDa
25,9 kDa
19,4 kDa
14,8 kDa
Abb. 41: Test der Seren verschiedener Kaninchen (K1, K2 und K3) nach 120 Tagen. Die
Stämme a) YN und b) YNΔycrΔydrΔynr) wurden üN in MG-Flüssigmedium geschüttelt.
Die Vorkulturen wurden einmal mit 1 x Readersalzen gewaschen und in
Minimalmedium mit Ethanol als C-Quelle überführt. Nach 2 h wurden die Zellen
geerntet, aufgeschlossen und die Zellextrakte im Western-Blot analysiert. Der
primäre AK (YCR-AK) wurde in einer Verdünnung von 1:2500 und der sekundäre
AK (Anti-Rabbit) in den Verhältnissen 1:5000 (K1 und K3) bzw. 1:10000 (K2) eingesetzt.
Die Seren aller drei Kaninchen ergeben im Stamm YN eine Bande im Bereich von ca.
27 kDa. Somit läuft diese Bande nicht in der Höhe der erwarteten Ycr010cp-Größe von ca.
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