Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
pression zu schwach, um sie detektieren zu können. Guaragnella and Butow (2003) konnten
das mit GFP fusionierte Ydr384cp mittels Fluoreszenzmikroskopie in der Cytoplasmamembran
nachweisen.
3.3.16 Bestimmung von sekretiertem Ammonium
Palková et al. (2002) stellten fest, dass Einzeldeletionsmutanten der GPR1-Orthologen in
S. cerevisiae eine niedrigere Ammoniumproduktion aufweisen, als der Wildtypstamm
(BY4742). Deshalb geht diese Gruppe davon aus, dass es sich bei den Homologen um Ammoniumtransporter
(Ato1-3p: ammonia transport outward) handeln könnte. Somit war von
Interesse, ob eine Doppel- und Tripeldeletion der Homologen einen weiteren Rückgang bzw.
völligen Ausfall des Ammoniumtransportes aus der Zelle zur Folge haben könnte.
3.3.16.1 Einfluss der Deletion von je zwei bzw. aller drei Gpr1p-Orthologen auf die
Ammoniumproduktion
Dillschneider (2003) untersuchte in ihrer Diplomarbeit, ob in den YN-Stämmen eine doppelte
Gendisruption bzw. Disruption aller drei Gene der GPR1-Orthologen eine weitere Auswirkung
auf die Ammoniumproduktion hat.
Nachdem die verschiedenen YN-Stämme der Hefe S. cerevisiae 12 d auf GM-Medium gewachsen
waren, wurde deren Ammoniumsekretion über einen Zeitraum von 25 min in MES-
Puffer untersucht. Die Ergebnisse eines repräsentativen Versuches sind in Abb. 44 dargestellt.
Die größte Menge an Ammonium wurde vom Wildtypstamm YN sekretiert. In den Deleti-
onsstämmen YNΔycr, YNΔydr und YNΔynr ging die Ammoniumsekretion gegenüber dem
Wildtypstamm um ein Drittel (YNΔycr) bis zur Hälfte (YNΔynr) zurück. Die Deletion von zwei
Genen der GPR1-Orthologen hatte gegenüber den Einzeldeletionen kaum einen Einfluss auf
den weiteren Rückgang der Sekretion von Ammonium, diese verringerte sich nur sehr wenig.
Überraschenderweise war die Tripelmutante ebenfalls noch in der Lage Ammonium zu
sekretieren.
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