Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

A
B
OD600
8
7
6
5
4
3
2
1
0
Ycr010cp-HA
Ydr384cp-HA
Ynr002cp-HA
0 5 10 15 20 25
t in h
0h 0,5h 1h 1,5h 2h 2,5h 3h 4h 6h 8h 10h 12h 24h
YN/p416YCR-HA
YN/p416YDR-HA
YN/p416YNR-HA
Ergebnisse
Ydr384cp-HA nicht
mehr nachweisbar
Abb. 28: Expression der mit dem HA-Tag fusionierten Homologen Ycr010cp, Ydr384cp
und Ynr002cp im Stamm YN während des Wachstums (0 – 12 h, 24 h) der Transformanden
in Minimalmedium mit Glucose als C-Quelle. Die Vorkulturen wurden
üN in MG-Flüssigmedium geschüttelt, einmal mit 1 x Readersalzen gewaschen
und die Hauptkultur mit einer OD600 von ca. 0,7 angeimpft. Zu den angegebenen
Zeitpunkten wurden jeweils 50 ml Kultur entnommen, die Zellen abzentrifugiert
und aufgeschlossen. In A) sind die Wachstumskurven und in B) die entwickelten
Western-Blots mit den Ponceau-S gefärbten PVDF-Membranen gezeigt.
Im Western-Blot konnte zum Zeitpunkt 0 h für Ycr010cp-HA nur eine sehr geringe Expression
detektiert werden. Ab 0,5 h war bis einschließlich 12 h keine Expression mehr nachweisbar.
Im Gegensatz dazu wurde im Northern-Blot zum Zeitpunkt von 0 h RNA nachgewiesen.
Dies deutet auf eine posttranslationale Regulation von YCR010c hin. Im Falle von Ydr384cp-
HA konnte vom Beginn des Versuches bis einschließlich 4 h das Protein nachgewiesen werden,
zum Zeitpunkt von 6 h (Beginn der exponentiellen Wachstumsphase) war es nur noch
schwach detektierbar. Ynr002cp-HA war bis zu 0,5 h gut detektierbar, danach war die Expression
des Proteins nur noch sehr schwach. Alle drei HA-getagten Homologen konnten
zum Zeitpunkt von 24 h sehr gut nachgewiesen werden, allerdings in unterschiedlicher Expressionsstärke
(YDR384c < YCR010c < YNR002c).
Im Western-Blot konnten nach 24 h alle drei homologen Proteine nachgewiesen werden,
dagegen war im Northern-Blot keine Expression von YDR384c bzw. im Falle von YNR002c
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