Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
detektierten Banden um das mit HA getagte Ycr010cp handelte. Die Proteinextrakte der
Stämme YN und YN/p416YCR-HA wurden im Western-Blot mittels anti-HA-AK und anti-
Ycr10cp-AK (vgl. Kapitel 3.3.14) analysiert (Abb. 26).
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A A B
37,1 kDa
25,9 kDa
19,4 kDa
Abb. 26: Analyse von Proteinextrakten mit dem anti-HA-AK bzw. anti-Ycr010cp-AK. Die
Stämme wurden üN in MG-Flüssigmedium kultiviert. Nach dem einmaligen Waschen
der Zellen in 1 x Readersalzen, wurden die Hauptkulturen in Minimalmedium
mit Ethanol angeimpft. Die Zellen wurden nach 2 bis 3 h geerntet und aufgeschlossen.
Die Analyse der Proteinproben erfolgte im Western-Blot mit anti-HA-
AK (1) bzw.anti-Ycr010cp-AK (2). A) YN/Ycr010cp-HA, B) YN.
Mit Hilfe des anti-Ycr010cp-AK konnten beide Banden, die auch durch den anti-HA-AK
nachgewiesen wurden, detektiert werden. Weiterhin trat in den Stämmen YN/p416YCR-HA
und YN eine weitere Bande im Bereich von 26 kDa auf, bei der es sich um das chromosomal
kodierte Ycr010cp handelte. Hier handelte es sich allerdings um keine Doppelbande.
3.3.13 Expression der Gpr1p-Orthologen in Saccharomyces cerevisiae
Creuzburg (2002) und Dillschneider (2003) befassten sich mit der Regulierung der Promotoren
von YCR010c, YDR384c und YNR002c durch verschiedene C-Quellen im Medium. Da-
bei wurde die β-Galactosidaseaktivität unter der Kontrolle dieser Promotoren gemessen (vgl.
Kapitel 3.3.10).
Die Expressionen der drei Homologen sollten in Northern- und Western-Blots genauer ana-
lysiert werden, da die Werte aus den Aktivitätsmessungen der β-Galaktosidase keine Rück-
schlüsse auf die tatsächlich gebildeten RNA- und Proteinmengen zulassen.
Für die Probennahme zur Northern-Blot-Analyse wurden alle Hauptkulturen mit einer OD600
von 0,1 angeimpft. Aus versuchstechnischen Gründen (Gewinnung von genügend Zellmate-
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