Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung ....................................................................................................1
1.1 Stressantwort von Mikroorganismen......................................................................... 1
1.1.1 Nährstoffmangel.................................................................................................. 1
1.1.2 Hitzestress .......................................................................................................... 4
1.1.3 Stress durch schwache Säuren und Ethanol ...................................................... 5
1.2 Aufnahme und Verwertung von Acetat ................................................................... 10
1.3 Die Gpr1/Fun34/yaaH-Proteinfamilie ...................................................................... 13
1.3.1 Das GPR1-Gen der Hefe Yarrowia lipolytica .................................................... 13
1.3.1.1 Charakterisierung der GPR1 d -Mutanten .................................................. 14
1.3.1.2 Regulation des Promotors des GPR1-Gens ............................................ 15
1.3.1.3 N-terminale Deletionen des Gpr1-Proteins .............................................. 16
1.3.1.4 Lokalisierung des Gpr1-Proteins.............................................................. 16
1.3.1.5 Expression des Gpr1-Proteins ................................................................. 17
1.3.1.6 Phosphorylierung des Gpr1-Proteins ....................................................... 17
1.3.1.7 Funktion des Gpr1-Proteins ..................................................................... 18
1.3.2 Die Gpr1p-orthologen Genprodukte Ycr10cp, Ydr384cp und Ynr002cp der
Hefe Saccharomyces cerevisiae....................................................................... 19
1.3.2.1 Regulation der Genexpression von YCR010c, YDR384c und YNR002c.20
1.3.3 Ammoniumsekretion der Hefe Saccharomyces cerevisiae............................... 21
1.4 Zielstellung der Arbeit ............................................................................................. 23
2 Material und Methoden.............................................................................25
2.1 Geräte ..................................................................................................................... 25
2.2 Chemikalien und Biochemikalien ............................................................................ 26
2.3 Kitsysteme .............................................................................................................. 26
2.4 Enzyme ................................................................................................................... 27
2.5 Antikörper................................................................................................................ 27
2.6 Nukleinsäuren ......................................................................................................... 27
2.6.1 DNA-Molekulargewichtstandards und Nucloeotide........................................... 27
2.6.2 Verwendete Plasmide ....................................................................................... 28
2.6.3 Konstruierte Plasmide ....................................................................................... 29
2.6.4 Oligonucleotide ................................................................................................. 30
2.7 Mikroorganismen .................................................................................................... 31
2.7.1 Escherichia coli ................................................................................................. 31
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