Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Einleitung
Durch den Austausch von Aminosäuren potentieller Phospholylierungsorte konnte später die
Aminosäure Ser37 als Phosphorylierungsort des Gpr1-Proteins identifiziert werden (Gentsch
and Barth, 2005).
1.3.1.7 Funktion des Gpr1-Proteins
Die von Augstein (2001) duchgeführte Deletion des GPR1-Gens im Stamm PO1d hatte keinen
Effekt auf die Essigsäuresensitivität. Im Gegensatz dazu wurde festgestellt, dass bei
Überimpfung des Stammes PO1dΔgpr1 von Minimalmedium mit Glucose auf Acetat als
C-Quelle die Zellen langsamer anwachsen als die des Wildtypstammes PO1d. In Minimalmedium
mit Glucose wurden keine Unterschiede im Wachstum festgestellt. Dies deutet auf
eine Funktion des GPR1-Gens bei der Adaptation an Acetat hin (Gentsch, 2003).
Augstein (2001) und Gentsch (2003) schlugen ein Modell zur möglichen Funktion von Gpr1p
vor. Es wird angenommen, dass Gpr1p in Abwesenheit von Essigsäure aktiv ist und Essigsäureadaptationsprozesse
inhibiert.
H +
H +
H 3 C-COOH
H3C-COO -
H3C-COO -
„Pma1p“ AcT Gpr1p
ATP ATD+P i
H +
H +
H 3 C-COOH
H3C-COO -
H3C-COO -
P P
Kinase
C-Quelle
Medium
Cytosol
Abb. 3: Hypothetisches Modell der Funktion von Gpr1p in Y. lipolytica (nach Gentsch,
2003). Mit roten Pfeilen sind aktivierende Prozesse, grün inhibierende Prozesse
dargestellt. Ebenso sind Proteine im aktiven Zustand rot und im inaktiven Zustand
grün gekennzeichnet. AcT: hypothetischer Acetattransporter, AmT: hypothetischer
Ammoniumtransporter, „Pma1p“: Pma1p-orthologes Protein.
Die Zugabe von Essigsäure bei niedrigem pH-Wert führt zum Einstrom von undissoziierter
Essigsäure ins Cytoplasma (Abb. 3). Dort dissoziiert diese und es kommt zur Anhäufung von
Protonen und Acetationen. Es wird angenommen, dass Gpr1p durch eine höhere intrazelluläre
Acetatkonzentration deaktiviert wird. Die Deaktivierung hat die Aufhebung der Hemmung
eines hypothetischen Acetattransporters (AcT) und der Protonenpumpe („Pma1p“) zur Folge.
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