Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Ergebnisse
Tab. 17: Wachstum von PO1d- und PO1dΔgpr1-Transformanden, die für C-terminal verkürzte
bzw. YNAYA-deletierte Gpr1p-Konstrukte kodieren. Die Transformanden wurden
nach 24 h Inkubation auf MMG-Platten auf Minimalmediumplatten mit Glucose bzw.
Acetat/Glucose als C-Quellen überstempelt und bei 28 °C inkubiert. Die Anzahl der
„+“ gibt die Stärke des Wachstums an. Dabei bedeuten „+++“, dass diese Transformanden
genauso gut wie Transformanden mit pYLG3 wuchsen. Konnte kein
Wachstum festgestellt werden, ist dies durch „-“ gekennzeichnet.
Plasmid Glucose Acetat/Glucose
PO1d PO1dΔgpr1 PO1d PO1dΔgpr1
pYLG3 +++ +++ +++ +++
pG1-P265 +++ +++ ++ +++
pG1-Y256 +++ +++ ++ +++
pG1-A247 +++ +++ + +++
pG1-F242 +++ +++ +++ +++
pG1-dYNYAYA +++ +++ +++ +++
pYLG2 +++ +++ - -
pG2-P265 +++ +++ - - (2 von 5 Transformanden)
pG2-Y256 +++ +++ - +++
pG2-A247 +++ +++ - +++
pG2-F242 +++ +++ +++ +++
pG2-dYNAYA +++ +++ +++ +++
In dieser Arbeit sollte weiterhin untersucht werden inwieweit C-terminale Deletionen von
Ycr010cp und Ynr002cp Auswirkungen auf die Sensitivität der Zellen gegenüber Essigsäure
haben. Ydr384cp wurde in diese Untersuchungen nicht mit einbezogen, da dieses Protein
kein YNAYA-Motiv enthält und kein Mutantenphänotyp zur Verfügung stand. Es wurden
Plasmide konstruiert, die für C-terminal verkürztes bzw. YNAYA-deletiertes Ycr010cp oder
Ynr002cp kodieren. Diese Plasmide wurden in die Stämme YN und YNΔycrΔydrΔynr trans-
formiert und das Wachstum auf Minimalmediumplatten mit Glucose bzw. Acetat getestet.
Das Ergebnis ist in Tab. 18 dargestellt.
Eine Verkürzung bzw. Deletion des YNAYA-Motivs von Ycr010cp und Ynr002cp hatte keine
Auswirkung auf das Wachstum der Transformanden mit Plasmiden, die für die jeweiligen
Wildtyp-Proteine kodierten. Wurden jedoch die Proteine der Mutantenallele verkürzt oder in
diesen das YNAYA-Motiv deletiert, so waren die Transformanden in der Lage auf Minimalmedium
mit Acetat als C-Quelle zu wachsen. Dies deutet darauf hin, dass das YNAYA-Motiv
auch in S. cerevisiae eine wichtige funktionelle Rolle spielt.
Zwischen den Stämmen YN und YNΔycrΔydrΔynr gab es im Gegensatz zu Y. lipolytica keine
Unterschiede im Wachstum auf Minimalmedium mit Acetat als C-Quelle.
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