Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Diskussion
klar, inwieweit nur Glucose diesen Effekt verursacht, oder ob auch andere C-Quellen dazu in
der Lage sind. Dies könnte geklärt werden, indem in einem Tropfplattentest den Zellen neben
Essigsäure z. B. Glycerin als zusätzliche C-Quelle angeboten würde.
4.8 Bestimmung von sekretiertem Ammonium
Palková et al. (2002) beobachteten, dass Mutantenstämme mit Deletionen der einzelnen der
GPR1-Orthologen weniger Ammonium sekretierten als der Wildtypstamm. Weiterhin zeigten
sie, dass Ycr010cp schwache Homologien zu einem Ammoniumtransporter in C. elegans
aufweist. Somit nahmen Palková et al. (2002) an, dass es sich bei diesen Proteinen um
Ammoniumtransporter (Ato1-3p) handeln könnte.
In dieser Arbeit wurde getestet, inwieweit eine Doppeldeletion oder Deletion aller drei Homologen
einen weiteren Einfluss auf die Produktion von Ammonium hatte. Es konnte festgestellt
werden, dass die Deletion zweier Homologe kaum eine weitere Erniedrigung der Ammoniumproduktion
zur Folge hatte. Der Stamm in dem alle drei Homologe deletiert waren
(YNΔycrΔydrΔynr) schied trotzdem noch Ammonium aus. Die sekretierte Ammoniummenge
war gleich der jener Stämme mit zwei deletierten GPR1-Orthologen. Dies lässt zum einen
vermuten, dass neben den drei Gpr1p-Orthologen noch weitere Ammoniumtransporter in S.
cerevisiae existieren könnten. Zum anderen könnten die drei Homologen in S. cerevisae selber
keine Ammoniumtransporter sein, sondern regulatorisch auf bisher nicht bekannte Ammoniumtransporter
wirken. Die von Palková et al. (2002) postulierten Homologien zwischen
dem potentiellen Ammoniumtransporter aus C. elegans und den drei Gpr1p-Orthologen sind
nur sehr schwach und stellen keinen eindeutigen Beweis dar (Abb. 50). In Abb. 51 ist weiterhin
ein Alignment des potentiellen Ammoniumtransporters aus C. elegans mit weiteren
putativen Ammoniumtransportern aus diesem Organismus gezeigt. Diese Proteine weisen
weitaus mehr homologe Bereiche zueinander auf als die Gpr1p-Orthologen zu dem Amoniumtransporter.
Weiterhin ist hier die Konsensussequenz der Ammoniumtransporter-Signatur
(ATS) (DxAGxxxVHLxGGxxxxxAxxxxxPR) völlig verschiedenen von der zwischen den
Gpr1p-Orthologen und dem Ammoniumtransporter ermittelten Konsensussequenz
(xFxGGxxxLxxGxxxxxxxxxxxxx). Somit handelt es sich in den Gpr1p-Orthologen bei dieser
Sequenz nicht um die typische Ammoniumtransporter-Signatur. Daher wird angenommen,
dass die Gpr1p-Orthologen möglicherweise regulatorisch bisher unbekannte Ammoniumtransporter
beeinflussen.
Weiterhin wurde getestet, inwieweit die Mutantenproteine von Ycr010cp (Ycr010cp-Q75,
Ycr10cp-D259) und Ynr002cp (Ynr002cp-Q74, Ynr002cp-D259) eine Auswirkung auf die
Ammoniumproduktion von Stämmen, die diese Proteine enthielten, hatten. Dabei sekretier-
ten die Transformanden der Stämme YNΔycr und YNΔynr, die das YCR010c- bzw.
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