Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Diskussion
re. Als ein wichtiger funktioneller Bereich in Ycr010cp und Ynr002cp ist der Loop zwischen
der zweiten und dritten Membrandomäne einzuordnen. Im vierten Loop konnten in beiden
Proteinen ebenfalls Bereiche identifiziert werden, in denen ein Aminosäureaustausch zu Essigsäuresensitivität
führt. Allerdings war dieser Bereich schon im Gpr1p als funktionell wichtig
betrachtet worden, da Austausche von Aminosäuren zu einer Essigsäuresensitivität führten.
Ebenfalls von Bedeutung für die Funktion ist der C-terminale Teil der Proteine. Deletionen
im C-Terminus von Gpr1-2p, Ycr010cp-Q75 und Ynr002cp-Q74 führen zur Aufhebung
der Sensitivität gegenüber Essigsäure.
Einige der mutierten Aminosäuren befinden sich in potentiellen Modifizierungsorten und deuten
somit auf eine mögliche Funktion dieser hin. Im Protein Ycr010c verursacht der Austausch
von E35 zu G die Ausprägung des Mutantenphänotyps. Diese Aminosäure liegt innerhalb
einer potentiellen Phosphorylierungsstelle der Proteinkinase A, allerdings könnte trotz
des Austausches dieser Aminosäure die resultierende Sequenz durch die Proteinkinase A
erkannt werden. Somit ist der Acetat-sensitive Phänotyp nicht durch eine mögliche Änderung
des Phosphorylierungsstatus erklärbar. Weiterhin liegen die ausgetauschten Aminosäuren
E144, N145 sowie T209 in Erkennungssequenzen für potentielle Phosphorylierungen durch die
Polo-like-Kinase (E144, N145) bzw. GSK3-Kinase (T209). Es kann aber nicht gesagt werden, ob
die Mutation E35 oder T209 zur Essigsäuresensitivität führt, da beide Mutationen in der gleichen
Transformande auftraten. Möglicherweise haben nur eine oder beide Aminosäuren
getrennt bzw. beide zusammen eine funktionelle Bedeutung. Die mutierten Aminosäuren A70
und F71 befinden sich innerhalb einer potentiellen Bindungsstelle für Adapter-Protein-
Komplexe. Alle anderen durch die zufällige Mutagenese ausgetauschten Aminosäuren liegen
außerhalb der Bereiche potentieller Modifizierungsstellen.
Einige der ausgetauschten Aminosäuren in Ynr002cp befinden sich ebenfalls in Erkennungssequenzen
für potentielle Phosphorylierungsstellen oder Interaktionsbereichen für
Adapter-Proteine. Innerhalb eines Phosphorylierungsortes für die Polo-like-Kinase liegt die
mutierte Aminosäure G147. Die veränderte Aminosäure S265 befindet sich in einer potentiellen
Modifizierungsstelle der GSK3-Kinase. Die umgebende Sequenz der ausgetauschten Aminosäure
M268 stellt eine mögliche Interaktionsstelle für ein Adapter-Protein dar. Allerdings
kann hier keine Aussage getroffen werden, ob der alleinige Austausch dieser Aminosäure zu
einem Essigsäure-sensitiven Phänotyp führt, da die isolierte Transformande drei ausgetauschte
Aminosäuren enthält. Die anderen Orte von ausgetauschten Aminosäuren befinden
sich außerhalb von potentiellen Modifizierungsstellen.
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