Funktionelle Analyse von Proteinen der Gpr1/Fun34/yaaH ...

Diskussion
copy Plasmid unter der Kontrolle der authentischen Promotoren exprimert. In diesen Untersuchungen
stellte sich ein wesentlicher Unterschied zu Y. lipolytica heraus. Obwohl die Mutantenallele
YCR010c-Q75, YCR010c-D259, YNR002c-Q74 und YNR002c-D259 eine Sensitivität
gegenüber Essigsäure verursachen, konnte dieser Phänotyp in Anwesenheit von Glucose
nicht mehr beobachtet werden. Nur auf Minimalmediumplatten mit Acetat als alleiniger
C-Quelle konnten Transformanden, welche die Mutantenallele trugen, nicht mehr wachsen.
Somit konnten, je nachdem welcher Promotor die Expression der Mutantenallele regulierte,
unterschiedliche Mutantenphänotypen auf Minimalmedium mit Acetat/Glucose beobachtet
werden. Dies könnte durch die unterschiedlichen Expressionshöhen der Mutantenallele verursacht
sein. Glucose wirkt auch in gleichzeitiger Anwesenheit anderer C-Quellen (Acetat,
Ethanol) reprimierend auf die Expression von YCR010c und YNR002c in S. cerevisiae.
Durch Aktivitätsmessungen der β-Galactosidase konnte gezeigt werden, dass sich nach dem
Verbrauch der Glucose im Medium die Expression der beiden Homologen erhöht
(Creuzburg, 2002). Im Gegensatz dazu ist die Expression der YCR010c- bzw. YNR002c-
Allele unter der Kontrolle des MET25-Promotors unabhängig von der C-Quelle immer unverändert
hoch. Die Expressionsstärke von GPR1-Mutantenallelen hat in Y. lipolytica dagegen
keine Auswirkung auf die Ausprägung des Mutantenphänotyps. Hier reichen bereits geringe
Mengen aus, um Sensitivität gegenüber Essigsäure zu verursachen (Augstein, 2001). Weiterhin
konnte in Y. lipolytica der Mutantenphänotyp von GPR1 auf Minimalmediumplatten mit
Essigsäure auch in Anwesenheit von Glucose beobachtet werden. In S. cerevisiae ist die
Glucose-Katabolit-Repression stärker ausgebildet als in Y. lipolytica. So ist Y. lipolytica im
Gegensatz zu S. cerevisiae z. B. in der Lage Acetat gleichzeitig mit Glucose zu verwerten
(Rodrigues and Pais, 2000). Dies könnte eine Ursache dafür sein, dass in Anwesenheit von
Glucose der Mutantenphänotyp (Essigsäuresensitivität) in S. cerevisiae nicht mehr ausgebildet
wird.
Transformanden des Stammes YN, die auf ihrem Plasmid für Ycr010cp-Q75 kodieren, wiesen
einen instabilen Phänotyp auf. Nur Zellen die frisch transformiert worden waren, konnten
nicht auf Minimalmedium mit Acetat als C-Quelle wachsen. Ältere Transformanden prägten
diesen Phänotyp nicht mehr aus. In der Tripelmutante konnte dies nicht beobachtet werden,
sie besaßen einen stabilen Mutantenphänotyp. Stand das Allel YCR010c-Q75 allerdings
unter der Kontrolle des MET25-Promotors, so konnte dieser Effekt nicht mehr beobachtet
werden. Die Ursachen für diesen Effekt sind gegenwärtig nicht bekannt.
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