THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

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Table des figures Figure 29. Mesure de l’activité spécifique de la β-galactosidase (Umiller.mg -1 ) chez B. subtilis contenant les vecteurs pDL et pXT-hisRS, ou les vecteurs pDL-hdcP et pXT-hisRS, en fonction de la croissance bactérienne. A DO600nm = 0,7 ; 20 mM de xylose sont ajoutés pour induire l’expression de hisRS, cloné sous le contrôle du promoteur pxyl (t1 : DO600nm = 1,0 ; t2 : DO600nm = 1,1 ; t3 : DO600nm = 1,2 ; t4 : DO600nm = 1,5) ..................................................... 99 Figure 30. Carte du vecteur suicide pGID701-odc ................................................................. 101 Figure 31. Organisation génétique de la voie de biosynthèse de la putrescine. Les gènes odc et potE ont été clonés dans le pGID052 puis transférés dans la souche O. oeni ATCC BAA-1163 ................................................................................................................................................ 101 Figure 32. Carte plasmidique du pGID052-odcpotE .............................................................. 102 10
Tables des tableaux Table des tableaux Tableau 1. Les bactéries lactiques du vin et leurs caractéristiques morphologiques et biochimiques (d’après Bartowsky, 2005 et Tourdot-Maréchal, 1991). .................................... 15 Tableau 2. Amines biogènes et acides aminés précurseurs (selon ten Brink et al, 1990). L’arginine est le précurseur de l’ornithine. L’agmatine peut être le précurseur de la putrescine (voie AgDI, Cf. paragraphe IV). La spermine et la spermidine, ne figurant pas dans ce tableau, sont formées à partir de la putrescine. ......................................................................... 19 Tableau 3. Les bactéries isolées du vin, productrices d’amines biogènes. ............................... 26 Tableau 4. Souches bactériennes utilisées. ............................................................................... 66 Tableau 5. Récapitulatif du protocole pour la réalisation d’une PCR avec la Taq Promega. Les amorces (Eurogentec) sont initialement concentrées à 100 µM. Une dilution au cinquième est effectuée avant utilisation. ........................................................................................................ 69 Tableau 6. Protocole pour la réalisation d’une PCR avec la Taq Haute Fidélité Roche. ......... 70 Tableau 7. Séquences des oligonucléotides utilisés au cours de ce travail. ............................. 72 Tableau 8. Récapitulatif des plasmides utilisés et construits. Mls R : résistance aux macrolides (érythromycine et lincomycine à 10 µg.mL -1 chez les bactéries Gram positives, 250 µg.mL -1 chez E. coli). ............................................................................................................................. 77 Tableau 9. Amines biogènes après réaction au DEEMM. La/les fonction(s) amine NH2 a (ont) subit la dérivatisation. Les ions caractéristiques, qui dérivent de l’ion parent, ont pour la plupart une masse m/z = 46 de moins que l’ion moléculaire parent. Par exemple, pour la tyramine : l’ion moléculaire parent a une masse m/z = 306, accompagnés d’autres ions caractéristiques de masse m/z = 260 (306-46) et 214 (260-46). ............................................... 82 Tableau 10. Efficacité de transformation de différentes souches de O. oeni. .......................... 92 Tableau 11. Mutagenèse d’acides aminés (AA) d’intérêt de l’ODC de O. oeni à muter. Le choix ces cibles est basé sur les études réalisées chez Lactobacillus 30a (Momany et al, 1995 ; Vitali et al, 1999). Les séquences protéiques de Lactobacillus 30a et O. oeni sont homologues à 68%. ..................................................................................................................................... 144 11
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