THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Annexes
simple recombinaison homologue (cf. Résultats), une stratégie de mutation par double
recombinaison homologue a été envisagée. En effet, Sato et al (2003) obtiennent des mutants
de Thermococcus kodakaraensis par double recombinaison homologue et non par simple
stratégie, ce qui permet de contrer le système de restriction/modification. Cette technique a
donc été employée chez O. oeni.
La stratégie adoptée pour construire un vecteur suicide a consisté à cloner une cassette
de résistance à l’érythromycine dans le pUC18 et d’entourer cette cassette des régions
flanquant du gène mleP (Figure 3). Le gène mleP de O. oeni est entouré des gènes mleA et
mleR en aval et des gènes dacA3 et luxS en amont. Les gènes mleA et mleR codent
respectivement l’enzyme malolactique et un régulateur transcriptionnel Le gène luxS code une
S-ribosylhomocystéinase et dacA3 code une D-alanyl-D-alanine carboxypeptidase. Les
régions flanquantes le gène mleP ont été amplifiées et clonées de part et d’autre de la cassette
ery. Le vecteur obtenu, nommé pmlePERY, dérivé du pUC18 ne peut se répliquer chez les
bactéries à Gram positif. Ces travaux se poursuivent afin de transférer le vecteur pmlePERY
chez O. oeni.
Figure 3. Construction du vecteur suicide pmlePery pour l’interruption du gène mleP
par double recombinaison homologue pour la construction du vecteur suicide
pmlePERY
CONCLUSION
Le rôle principal du métabolisme du L-malate et du citrate chez O. oeni est la
production d’une force proton-motrice qui génère de l’énergie. Cette énergie vient s’ajouter
au pool d’ATP intracellulaire. Le transport d’acides organiques est donc de première
importance pour la cellule, d’où l’intérêt dans l’amélioration des connaissances pour ces
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