THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

DISCUSSION-PERSPECTIVES
Partie I
Discussion-Perspectives
Dans le cadre de mes travaux de thèse, nous avons tenté de développer des outils
moléculaires chez O. oeni. Malgré tous nos efforts, nous n’avons pas réussi à exprimer les
clusters hdc de L. hilgardii et odc de O. oeni, chez cette bactérie d’intérêt œnologique. Aucun
mutant pour le gène codant l’ornithine décarboxylase n’a été isolé. Cependant, au regard des
différentes expérimentations conduites, il apparaît que d’autres stratégies peuvent être mise en
œuvre.
Un point clé dans l’obtention de mutants est l’amélioration de l’efficacité de
transformation. Celle-ci est fortement corrélée au niveau de perméabilité de la paroi cellulaire.
En s’inspirant des protocoles décrits chez d’autres microorganismes, différents traitements
visant à déstabiliser la paroi ont déjà été employés. Mais il reste encore des agents à tester, par
exemple l’acétate de lithium et le dithiothreitol. En effet, l’électroporation des cellules de
Lactococcus lactis spp. lactis, pré-traitées à ces agents, permet d’augmenter le nombre de
transformants par microgramme d’ADN de 10 5 à 10 7 (Papagianni et al, 2007). De plus, il
faudrait diminuer la taille du vecteur à transformer, car l’efficacité de transformation est
inversement proportionnelle à la taille du plasmide. L’utilisation d’un vecteur à réplication
thermosensible est également une approche envisagée pour la création de mutant chez O.
oeni, par simple ou double recombinaison homologue. Cependant l’efficacité de transfert
obtenue chez O. oeni est néanmoins suffisante pour effectuer de l’expression hétérologue.
C’est donc cette approche vers laquelle nous nous sommes tournés.
L’échec dans l’expression des clusters hdc et odc est sans doute lié aux gènes eux-
mêmes. En effet, des gènes ont déjà été exprimés chez O. oeni à l’aide du pGID052 (Assad-
Garcia et al, 2008). Dans ce cas précis, il s’agissait d’un gène codant une protéine tronquée,
issu d’un gène codant une protéine native de O. oeni, et non de gènes provenant d’une autre
souche ou de genre différent comme L. hilgardii. L’absence de facteurs de régulation
spécifiques, la non reconnaissance des promoteurs, l’instabilité des transcrits, sont peut être
les raisons empêchant l’expression hétérologue chez O. oeni. Cependant, l’ornithine
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