THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

1) Quantification des amines biogènes par TLC
Synthèse bibliographique
Les amines biogènes peuvent être détectées et dosées par chromatographie liquide
(HPLC : High Pressure Liquid Chromatography) ou sur couche mince (TLC: Thin Layer
Chromatography) (Costantini et al, 2006). Néanmoins, cette méthode est plus qualitative que
quantitative car moins précise que l’HPLC, mais ne requiert pas un matériel sophistiqué. De
plus, la TLC est plus rapide et moins couteuse. Elle peut être appliquée à la détection de
l’histamine, la putrescine et la cadavérine dans le poisson et les autres produits de la mer
(Shakila et al, 2001). Une autre méthode a été développée pour l’identification et la semi-
quantification de huit amines biogènes produites par différents genres bactériens (Latorre-
Moratalla et al, 2009). Selon cette nouvelle technique, les bactéries peuvent être classées en
faible, modéré, ou fort producteurs. Dans le premier cas, aucun spot n’est détecté ou la
production est inférieure à 50 mg.L -1 . Dans le second cas, la production se situe entre 50 et
500 mg.L -1 , alors qu’un fort producteur produit plus de 500 mg.L -1 d’amines biogènes. Dans
un domaine moins appliqué, la TLC a été utilisée pour vérifier la production de putrescine par
Serratia liquefaciens après clonage du gène codant l’ornithine décarboxylase (De Las Rivas et
al, 2007).
2) Quantification des amines biogènes par HPLC
Dans la littérature, l’HPLC se révèle être une méthode de choix pour l’identification et
la quantification. Due à la nature hydrophobe des amines biogènes, la colonne utilisée est une
colonne phase inverse (RP-C18). Une réaction de dérivation souvent pré-colonne, mais
quelquefois post-colonne (Sass-Kiss et al, 2000), est nécessaire à la détection. Le réactif de
dérivatisation le plus couramment utilisé est l’OPA (ophtaldialdéhyde) (Pereira Monteiro &
Bertrand, 1994 ; Busto et al, 1997 ; Vidal-Carou et al, 2003 ; Pereira et al, 2008) ou le dansyl-
chloride (Moret et al, 1992 ; Anli et al, 2004 ; Dugo et al, 2006). L’OPA réagit avec les
amines primaires en quelques minutes pour former des dérivés fluorescents, mais instables.
Tandis que le dansyl-chloride est un réactif non-spécifique car il dérive aussi bien les amines
primaires et secondaires que les phénols, les alcools aliphatiques et quelques sucres qui sont
détectés aux UV. Ainsi, des traitements supplémentaires sont nécessaires avec une
dérivatisation au dansyl-chloride afin d’éliminer les composés secondaires. Par exemple, les
échantillons peuvent être purifiés sur colonne SPE C18 pour éliminer les composés
35