THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Chapitre III : transcriptomique
La PCR quantitative en temps réel
A. Définition
Matériels et méthodes
Figure 22. PCR en temps réel en présence de SYBR green (www.ilm.pf/PCRtempsreel)
La PCR quantitative en temps réel a été appliquée pour la mesure relative de
l’expression de gènes, c'est-à-dire la quantification des ARN messagers (ARNm) par rapport à
un contrôle interne. Cette technique repose sur l’utilisation d’un agent fluorescent qui se fixe
à l’ADN et d’un système de détection de fluorescence correspondant. L’augmentation de la
fluorescence est directement proportionnelle à la quantité d’amplicons générés au cours de la
PCR. Ceci permet d’établir une relation proportionnelle entre quantité de matrices initiales et
quantité d’ADN complémentaires (ADNc) amplifiés après un certain nombre de cycles de
PCR. L’analyse de la quantité de produits amplifiés s’effectue pendant la phase exponentielle
d’amplification, car c’est pendant cette phase que le taux d’amplification est constant. L’ajout
d’un agent fluorescent au mélange de PCR permet une quantification par détection de
l’intensité de fluorescence à chaque cycle PCR. A chaque échantillon correspond un cycle
seuil, noté CT (cycle threshold). Il correspond au cycle à partir duquel l’intensité de la
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