THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Synthèse bibliographique
réversible. De nombreux protocoles ont été décrits pour transformer les bactéries à Gram
positif. Ils reposent sur une série de lavages, visant à éliminer les sels du milieu, ce qui a pour
but de fragiliser l’enveloppe cellulaire, puis les cellules dites compétentes sont resuspendues
dans un tampon d’électroporation et mises en contact avec l’ADN (un plasmide) avant d’être
électroporées. Des agents tels que la glycine (Turgeon et al, 2006), la pénicilline (Wei et al,
1995), le lyzozyme ou la thréonine (Rodriguez et al, 2007) sont employés chez les bactéries à
Gram positif pour fragiliser la paroi.
2) La chimiocompétence
Le traitement des cellules au chlorure de calcium, suivi d’un choc thermique,
perméabilise la membrane et permet l’entrée d’ADN.
3) La biolistique
Le principe de la biolistique consiste à délivrer en force de l’ADN sur des cellules par
propulsion. La force de propulsion est obtenue par explosion d’une poudre dans une balle, ou
par décompression d’un gaz (l’hélium majoritairement utilisé). L’ADN à introduire est
d’abord précipité sur des billes de tungstène ou d’or d’environ 1 µm de diamètre. Puis ces
billes sont placées dans un canon à particules et projetées sur les cellules à transformer. Cette
technique est utilisée pour le transfert direct de gènes dans des explants de plantes, ou dans
des tissus animaux in vivo. Cette méthode apparaît dans la littérature sous les noms : « the
particle gun method », « the gene gun method », « the microprojectile method », « the particle
acceleration method », « the bio-blaster method ». Le terme biolistique décrit à la fois le
processus et les appareils associés utilisés pour cibler le matériel biologique vivant (Sanford,
1988).
II. Les outils génétiques pour l’exploration fonctionnelle de gènes
A. Les transposons
Les éléments génétiques mobiles jouent un rôle dans l’évolution et l’adaptation
bactérienne. Ils sont souvent associés à des gènes conférant un avantage sélectif.
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