THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Résultats
quatre pour le cluster hdc porté par un plasmide. De plus, la putrescine est l’amine biogène
majoritaire du vin (Marcobal et al, 2005 ; Mangani et al, 2005).
B. La putrescine dans la résistance au stress acide chez O. oeni
De même que pour l’étude du rôle de l’histamine dans l’hypothèse de la lutte contre le
stress acide chez O. oeni, la fonction de la synthèse de putrescine à également été explorée.
Contrairement aux gènes de la voie HDC portés par un plasmide, les gènes de la voie
ODC de O. oeni sont localisés au niveau chromosomiques (Marcobal et al, 2004, 2006). La
stratégie d’interrompre le gène odc par simple recombinaison homologue a d’abord été tentée.
Pour cela le vecteur pGID701 (Oraby, 2002), dérivé du pORI19 a été utilisé. Une région
interne de odc a été clonée dans ce vecteur et le pGID701-odc ainsi obtenu (Figure 30) a été
transféré dans la souche O. oeni BR14/97 (Guerrini et al, 2002) portant les gènes odc et potE.
Des transformants ont été obtenus mais aucun mutants. Cela peut s’expliquer par plusieurs
raisons. Tout d’abord, le premier frein à l’obtention de mutants est l’efficacité de
transformation qui n’est pas suffisamment élevée par rapport à cette stratégie. Ensuite, la
stratégie de mutation par simple recombinaison homologue n’est peut être pas bien adaptée.
En effet, lors d’une étude sur l’interruption de gènes par recombinaison homologue chez
Thermococcus kodakaraensis, une archée hyperthermophile, Sato et al (2003) n’obtiennent
aucune mutation par simple crossing-over. Cependant, une interruption du gène ciblé a été
obtenue par double recombinaison. L’échec dans l’obtention de mutant par une approche en
simple recombinaison serait dû au clivage par le système de restriction/ modification (RM) de
l’ADN circulaire. Les systèmes de RM sont avant tout un moyen de défense des bactéries
contre l’ADN hétérologue. Ils regroupent des méthylases et des enzymes de restriction.
Chaque souche bactérienne possède un profil de méthylation propre de son ADN, et l’ADN
exogène, qui possède un profil de méthylation différent, est dégradé par les enzymes de
restriction. Aussi, la méthylation in vitro de plasmides est envisagée pour augmenter
l’efficacité de transformation. Ce moyen a permis de transformer Helicobacter pylori
(Donahue et al, 2000) ainsi que Bacillus cereus (Groot et al, 2008). Il serait peut être possible
d’envisager cette stratégie chez O. oeni.
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