THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Résultats
La production d’histamine a d’abord été mesurée dans la souche E. coli EC101 qui a
servi à la construction du pGID052-hdcAB. Cette souche a été ensemencée en milieu LB à pH
5 contenant 10 g.L -1 d’histidine. Aucune production d’histamine n’a été détectée dans le
surnageant cellulaire, probablement parce que le gène du transporteur HdcP n’a pas été inclus
à la construction. Les cellules ont donc été récoltées en phase stationnaire. Puis l’activité
enzymatique de l’histidine décarboxylase a été mesurée sur l’extrait cellulaire, selon le
protocole décrit par Landete et al (2008). Le protocole utilisé par Marcobal et al (2006) a
également été testé. L’échantillon a ensuite été analysé à l’HPLC, mais l’histamine n’a pas été
détectée. En parallèle, des expériences de RT-PCR ont été effectuées sur les ARN de E. coli
EC101 contenant le pGID052-hdcAB, mais hdcA ne semble pas s’exprimer. Ces résultats
peuvent certainement s’expliquer par un problème d’expression des gènes issus d’une bactérie
à Gram positif chez un hôte à Gram négatif.
Suite à cette première construction, le vecteur pGID052-hdcPAB, comportant le gène
hdcP, a été construit et transféré chez O. oeni. Le séquençage du vecteur confirme la qualité
de la construction. Les expériences se sont donc focalisées sur ces nouveaux transformants
portant les principaux gènes de la voie HDC.
Figure 24. Cartes plasmidiques des vecteurs pGID052-hdcAB et pGID052-hdcPAB
Les clones de O. oeni ont été ensemencés en milieu CarrM acide à pH 4,8 (Lucas et al,
2005) et en présence de 10 g.L -1 d’histidine. Puis, les surnageants de culture ont été analysés
par HPLC. Cependant, aucune détection d’histamine n’a été obtenue. La même expérience a
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