THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Sommaire
C. Le sulfitage et les enzymes lytiques utilisées en vinification .................................... 53
Chapitre II : Les outils moléculaires pour l’analyse fonctionnelle de gènes ............................ 55
I. Les méthodes de transfert génétique .............................................................................. 55
A. Les transferts naturels ................................................................................................ 55
1) La conjugaison ....................................................................................................... 55
2) La transformation ................................................................................................... 56
3) La transduction ....................................................................................................... 57
B. Les transferts artificiels ............................................................................................. 57
1) L’électroporation .................................................................................................... 57
2) La chimiocompétence ............................................................................................ 58
3) La biolistique .......................................................................................................... 58
II. Les outils génétiques pour l’exploration fonctionnelle de gènes ................................... 58
A. Les transposons .......................................................................................................... 58
B. Les plasmides ............................................................................................................. 59
1) Les vecteurs transférés chez les bactéries à Gram positif ...................................... 59
2) Les vecteurs intégratifs ........................................................................................... 60
III. Transferts génétiques chez O. oeni ............................................................................ 62
A. Les plasmides natifs de O.oeni .................................................................................. 62
B. Le pGID052 de O. oeni .............................................................................................. 63
C. Transferts génétiques chez O. oeni ............................................................................ 64
MATERIELS ET METHODES ............................................................................................... 66
Chapitre I .................................................................................................................................. 66
I. Souches bactériennes utilisées et milieux de culture ..................................................... 66
II. Criblage des souches productrices d’amines biogènes .................................................. 67
III. Extraction d’ADN ...................................................................................................... 67
IV. Amplification par PCR (Polymerase Chain Reaction) .............................................. 68
A. Amplification avec la Taq Promega .......................................................................... 68
B. Amplification avec la Taq Haute Fidélité Roche ....................................................... 69
V. Préparation de bactéries compétentes ............................................................................ 70
A. Escherichia coli électrocompétentes .......................................................................... 70
B. Bacilus subtilis compétentes ...................................................................................... 71
C. Oenococcus oeni électrocompétentes ........................................................................ 71
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