THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Table des figures
mobilisable (ou conjugatif) au site oriT. L’ADN transféré est monocaténaire. 3 : après ligation
des brins d’ADN, 4 : ils sont répliqués dans chacune des cellules. .......................................... 56
Figure 14. Stratégie générale d’intégration par double recombinaison homologue (Biswas et
al, 1993). Dans une première étape à 37,5°C, le plasmide s’intègre par simple recombinaison
homologue. Puis, un changement de température à 28°C, active la réplication du plasmide
intégré (Ori Ts), stimulant un second évenement de recombinaison homologue. .................... 61
Figure 15. Carte du plasmide cryptique pRS2 de O. oeni (Mesas et al, 2001) ........................ 63
Figure 16. L. hilgardii 0006 (Lucas et al, 2005) producteur d’histamine, dans le milieu de
Bover-Cid & Holzapfel (1999) contenant du pourpre de bromocrésol comme indicateur
coloré. A gauche: tube ensemencé avec L. hilgardii 0006 : le milieu vire au mauve du à
l’activité décarboxylase qui induit une alcalinisation du pH. A droite : milieu avant
ensemencement. ........................................................................................................................ 67
Figure 17. Stratégie de clonage des gènes hdcP, hdcA et hdcB. Les fragments A et B sont
d’abord sous-clonés dans le pCR-XL-TOPO, avant d’être clonés dans le pGID052. .............. 74
Figure 18. Stratégie de clonage des gènes odc et potE. ............................................................ 75
Figure 19. Stratégie de clonage du gène hisRS dans le pXT en deux parties. ......................... 76
Figure 20. Test de clones de B. subtilis pour une intégration au site amyE. Les colonies avec
un halo n’ont pas intégrées les gènes d’intérêt. ........................................................................ 77
Figure 21. Evolution du pourcentage du solvant B au cours de l’analyse. ............................... 81
Figure 22. PCR en temps réel en présence de SYBR green (www.ilm.pf/PCRtempsreel) ...... 87
Figure 23. Organisation génétique de la voie de biosynthèse de l’histamine. Les gènes hdcP,
hdcA et hdcB ont été clonés dans le pGID052 chez O. oeni. Le gène hisRS code pour une
histidyl-tRNA synthétase .......................................................................................................... 93
Figure 24. Cartes plasmidiques des vecteurs pGID052-hdcAB et pGID052-hdcPAB ............ 94
Figure 25. Clonage des régions promotrices de hdcP et hdcA dans le pDL. Le nombre de
paires de bases entre chaque gène correspond à la taille des régions intergéniques. ............... 96
Figure 26. Carte du pDL-hdcP et du pDL-hdcAB: la région promotrice de hdcP et hdcA a été
clonée en fusion avec le gène codant la β-galactosidase (bgaB) .............................................. 96
Figure 27. Mesure chez B. subtilis de l’activité spécifique de la β-galactosidase (Umiller.mg -
1 ), des fusions transcriptionnelles portées par les vecteurs pDL, pDL-hdcAB et pDL-hdcP, en
fonction de la croissance bactérienne (t1 : DO600nm = 0,6 ; t2 : DO600nm = 1,2 ; t3 : DO600nm =
2,6) ............................................................................................................................................ 97
Figure 28. Carte du vecteur pXT-hisRS ................................................................................... 98
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