THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Résultats
Figure 25. Clonage des régions promotrices de hdcP et hdcA dans le pDL. Le nombre de
paires de bases entre chaque gène correspond à la taille des régions intergéniques.
Le pDL est un vecteur navette E. coli-B. subtilis intégratif chez B. subtilis.
L’intégration est site spécifique grâce à la présence de deux régions du gène amyE codant
pour l’ α-amylase. L’intégration du vecteur peut aisément être lue sur une boite enrichie en
amidon en présence de lugol. Après intégration au chromosome l’activité β-galactosidase a
été dosée en présence d’ONPG (Ortho Nitro Phényl Galactopyranoside). La mesure de
l’activité permet d’être plus précis, comparé à une simple lecture sur boîte (criblage
blanc/bleu). Les résultats montrent que les régions promotrices de hdcP et hdcA-hdcB sont
fonctionnelles chez B. subtilis 168 (Figure 27).
Figure 26. Carte du pDL-hdcP et du pDL-hdcAB: la région promotrice de hdcP et hdcA
a été clonée en fusion avec le gène codant la β-galactosidase (bgaB)
3) Test de l’induction de l’activité β-galactosidase en présence
d’acide aminé précurseur (histidine)
Afin de détecter une éventuelle induction de l’activité de ces promoteurs en présence
d’histidine, le dosage de l’activité β-galactosidase a été réalisé sur des cellules cultivées en
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