THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

A. L’histamine dans la résistance au stress acide chez O. oeni
Résultats
1) Clonage de l’histidine décarboxylase hdcA et de la perméase
associée hdcP de Lactobacillus hilgardii 0006 chez O. oeni
ATCC BAA-1163.
Au commencement de ma thèse, la souchotèque du laboratoire ne contenait pas de
bactéries lactiques productrices d’amines biogènes. Sachant que les gènes de ces voies
métaboliques sont instables et transmis par transfert horizontal, le criblage de souches, en
condition acide et en présence d’acides aminés précurseurs, est nécessaire à l’isolement des
bactéries productrices. En partenariat avec l’Université de Bordeaux 2, impliquée dans le
projet européen, nous avons acquis la souche L. hilgardii 0006 (Lucas et al, 2005) productrice
d’histamine et dont le transporteur a été caractérisé. Cette souche a donc été utilisée pour le
clonage dans le pGID052 du locus portant les gènes codant l’histidine décarboxylase et la
perméase associée (Figure 23). Ce vecteur recombinant a été transféré dans la souche O. oeni
ATCC BAA-1163, déficiente pour la synthèse d’amines biogènes. Maintenu au-delà de cent
générations sur milieu non-sélectif (Beltramo, 2004), le pGID052 est un vecteur stable chez
O. oeni. Le clonage du locus hdc placé sous contrôle de son propre promoteur permet donc de
stabiliser le phénotype, afin d’étudier l’implication de ces gènes dans la survie de la souche au
stress acide. Deux constructions ont été réalisées : d’une part, le clonage des gènes hdcA et
hdcB, le gène codant l’enzyme nécessaire à la maturation de HdcA (Trip et al, 2011) ; et
d’autre part, le clonage des gènes hdcA, hdcB et hdcP codant le transporteur. Les vecteurs
ainsi créés, nommés pGID052-hdcAB et pGID052-hdcPAB (Figure 24) ont été transférés
avec succès dans la souche O. oeni ATCC BAA-1163.
Figure 23. Organisation génétique de la voie de biosynthèse de l’histamine. Les gènes
hdcP, hdcA et hdcB ont été clonés dans le pGID052 chez O. oeni. Le gène hisRS code
pour une histidyl-tRNA synthétase
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