THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Résultats
été répétée en milieu LAC à base de jus de raisins à pH 5, sans succès. Les profils
chromatographiques des surnageants de la souche ATCC BAA-1163 contenant le pGID052
(témoin) et de la souche portant le pGID052-hdcPAB se sont avérés strictement identiques.
Ces résultats peuvent être dus à un problème d’expression des gènes de L. hilgardii
chez O. oeni. Afin de vérifier la présence de transcrits, des expériences de RT-PCR ont été
réalisées à partir de l’ARN extrait des clones de O. oeni contenant le pGID052-hdcPAB. Les
bactéries ont été cultivées en milieu FT80 à pH 4,8 avec 10 g.L -1 d’histidine. Les transcrits
hdcA et hdcP ont été détectés pour L. hilgardii 0006, cultivé dans les mêmes conditions, alors
qu’aucun transcrit n’a été détecté pour les clones de O. oeni.
Dans le but de comprendre l’absence de production d’histamine, des hypothèses ont
été émises concernant la transcription des gènes clonés, à savoir les régions promotrices de
hdcA et hdcP sont-elles fonctionnelles ? En effet, peu d’études transcriptionnelles existent
concernant ces locus. Chez L. buchneri (Martin et al, 2005), producteur d’histamine, des
expériences par la technique de Northern blot ont été réalisées en employant des sondes
complémentaires de hdcA, hdcB ou hisRS, pour définir la nature des transcrits
(monocistronique ou polycistronique). Les résultats ont été confirmés par RT-PCR. Puis des
promoteurs putatifs ont été identifiés, basé sur l’observation de séquence. Mais ils n’ont pas
été clairement définis. Nous nous sommes donc intéressés aux régions promotrices de
l’histidine décarboxylase et du transporteur, dans le but d’étudier leur fonctionnalité.
2) Etudes transcriptionnelles des régions promotrices de hdcA
et hdcP de Lactobacillus hilgardii 0006
Des études de fusions transcriptionnelles ont été réalisées. A l’aide du pDL (Derré et
al, 2000), des fusions transcriptionnelles ont été construite entre les régions promotrices des
gènes hdcP ou hdcA (Figure 25) et le gène codant une β-galactosidase de Bacillus
thermophilus. Les vecteurs pDL-hdcP et pDL-hdcAB ainsi construits (Figure 26), ont été
transférés chez E. coli. En présence de X-gal, les transformants apparaissent sous forme de
colonies bleues traduisant donc la fonctionnalité de ces deux promoteurs chez E. coli. Mais
quand est-il de l’activité de ces promoteurs chez une bactérie à Gram positif ?
Afin d’apporter un élément de réponse, les vecteurs recombinants ont été transférés chez
Bacillus subtilis.
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