THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Synthèse bibliographique
Leuconostoc, Streptococcus, Enterococcus, Listeria, Pediococcus, Lactobacillus (Gonzales &
Kunka, 1983 ; Romero et al, 1987 ; Pucci et al, 1988 ; Shrago & Dobrogosk, 1988 ;
Thompson & Collins, 1988 ; Langella et al, 1993 ; Langella et al, 1996 ; Charpentier et al,
1999).
2) Les vecteurs intégratifs
Ces outils ont été conçus pour la mutagénèse dirigée. Des exemples sont développés
concernant les bactéries à Gram positif.
Un outil permettant de générer des mutations chromosomiques chez les bactéries à
Gram positif, utilisant un vecteur nommé pORI, a été développé (Leenhouts et al, 1996). Ce
plasmide est un vecteur à réplication conditionnelle contenant le gène lacZ’ de E. coli, ce qui
permet une sélection des plasmides recombinants selon le principe de l’α-complémentation.
Cependant, ce plasmide ne contient pas le gène repA codant la protéine d’initiation de la
réplication. Il ne peut donc pas se répliquer chez les bactéries à Gram positif à moins que
repA soit portée en trans, comme chez E. coli EC101 (Law et al, 1995).
Chez la bactérie lactique modèle, Lactococcus lactis, Biswas et al (1993) ont
développé un système d’intégration génomique par simple ou double crossing-over. Il s’agit
d’un plasmide thermosensible nommé pG + host5 qui se réplique via le mécanisme de cercle
roulant. Ce mode de réplication favorise la recombinaison intramoléculaire du fait de la
présence d’ADN simple brin. Ce plasmide contient une origine de réplication dérivée du
pBR322 permettant sa réplication chez E. coli, et une origine de réplication thermosensible Ts
pour le maintien du vecteur chez les bactéries à Gram positif. Il s’agit donc d’un vecteur
navette à réplication conditionnelle (28°C) chez les bactéries à Gram positif. La stratégie
générale pour une intégration par double crossing-over est décrite ci-dessous (Figure 14).
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