THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Synthèse bibliographique
l’absence de réplication dans la cellule hôte. Autrement dit, si un plasmide est instable, la
proportion de cellules recombinantes portant ce plasmide diminuera au cours des générations.
Au laboratoire, le pGID052 a été transféré chez O. oeni par conjugaison (Beltramo et
al, 2004) en utilisant L. lactis comme souche donneuse et le vecteur helper pVA797 contenant
les gènes de transfert tra. La présence d’une oriT permet de mobiliser le pGID052. Comparé
aux pIP501 et au pVA797, ce plasmide s’avère stable chez O. oeni, ce qui constitue une étape
majeure pour pouvoir exprimer des gènes chez cette bactérie.
Le pGID052 a également été utilisé en tant que vecteur d’expression (Assad-Garcia et
al, 2008). Un gène, codant une protéine tronquée de O. oeni a été cloné dans le pGID052. Ce
gène code la région amino-terminale de la ClpATPase ClpL2 de O. oeni (famille des
HSP100). Le vecteur recombinant a été introduit chez O. oeni par électroporation.
L’expression de ce gène, placé sous le contrôle de son propre promoteur, a été visualisée par
immunodétection utilisant des anticorps dirigés contre ClpL2. Bien que l’on dispose d’un
vecteur d’expression pour O. oeni, il est nécessaire de l’améliorer, notamment en lui
attribuant des signaux de transcription optimaux.
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