THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Figure 32. Carte plasmidique du pGID052-odcpotE
Résultats
Les constructions réalisées dans le pGID052 ne semblent pas s’exprimer, bien que ce
vecteur est déjà été utilisé et validé en tant que vecteur d’expression chez O. oeni (Assad-
Garcia et al, 2008). Un facteur de régulation est peut être manquant, ou les transcrits sont sans
doute instables et dégradés. De plus les gènes issus de L. hilgardii sont peut être reconnus par
le système de restriction/ modification de O. oeni, le plasmide serait alors dégradé. Mais cette
hypothèse est caduque au regard du clonage de l’ornithine décarboxylase et du transporteur
associé provenant d’une souche de O. oeni. Le problème majeur se situe au niveau de la
transcription, et plus précisément dans la reconnaissance des promoteurs. Sachant qu’une
seule copie du pGID052 est présente par cellule, l’utilisation d’autres promoteurs, comme par
exemple des promoteurs inductibles et forts, ou des promoteurs constitutifs reconnus par la
machinerie de O. oeni, permettrait peut être d’obtenir une meilleure expression. Pour pallier
justement à ce problème, la construction d’un vecteur d’expression dérivé du pGID052 est en
cours au laboratoire.
Dans le cadre du projet européen, l’équipe de recherche dirigée par J. Lolkema a
clonée l’ornithine décarboxylase odc et le transporteur potE de O. oeni chez L. lactis, sous
contrôle du promoteur inductible à la nisine dans le pNZ8048. Mais aucune production de
putrescine n’a été observée. Alors que le clonage du transporteur seul est fonctionnel. Des
questions restent donc en suspens concernant l’expression des gènes de O. oeni en système
d’expression hétérologue.
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