THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

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Figure 32. Carte plasmidique du pGID052-odcpotE Résultats Les constructions réalisées dans le pGID052 ne semblent pas s’exprimer, bien que ce vecteur est déjà été utilisé et validé en tant que vecteur d’expression chez O. oeni (Assad- Garcia et al, 2008). Un facteur de régulation est peut être manquant, ou les transcrits sont sans doute instables et dégradés. De plus les gènes issus de L. hilgardii sont peut être reconnus par le système de restriction/ modification de O. oeni, le plasmide serait alors dégradé. Mais cette hypothèse est caduque au regard du clonage de l’ornithine décarboxylase et du transporteur associé provenant d’une souche de O. oeni. Le problème majeur se situe au niveau de la transcription, et plus précisément dans la reconnaissance des promoteurs. Sachant qu’une seule copie du pGID052 est présente par cellule, l’utilisation d’autres promoteurs, comme par exemple des promoteurs inductibles et forts, ou des promoteurs constitutifs reconnus par la machinerie de O. oeni, permettrait peut être d’obtenir une meilleure expression. Pour pallier justement à ce problème, la construction d’un vecteur d’expression dérivé du pGID052 est en cours au laboratoire. Dans le cadre du projet européen, l’équipe de recherche dirigée par J. Lolkema a clonée l’ornithine décarboxylase odc et le transporteur potE de O. oeni chez L. lactis, sous contrôle du promoteur inductible à la nisine dans le pNZ8048. Mais aucune production de putrescine n’a été observée. Alors que le clonage du transporteur seul est fonctionnel. Des questions restent donc en suspens concernant l’expression des gènes de O. oeni en système d’expression hétérologue. 102
Résultats Suite aux différents échecs relatifs à la mutation et à l’expression du gène de l’ornithine décarboxylase chez O. oeni, la caractérisation du produit de ce gène a été menée par production de l’enzyme chez E. coli et caractérisation in vitro après purification. La partie codante du gène a été cloné sous contrôle du promoteur T7 fort et inductible en présence d’IPTG, ce qui explique en partie la réussite dans l’expression de l’ODC de O. oeni chez E. coli. 103
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Tables des tableaux Table des table
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Introduction Pour faire face à ce
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Synthèse bibliographique contre un
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1) Quantification des amines biogè
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evis GAAGTTAATCAAGAATTAGTTGCCGGCAAG
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curvatus AGCTGGTAAAGTAACGGTTCTTCGGG
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