THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Annexes
surface des vésicules perturbe l’intégrité membranaire. Une autre approche doit donc être
développée pour l’étude fonctionnelle des gènes de O. oeni.
Figure 2. Détection par immuno–détection des transporteurs d’acide organique
surproduits chez L. plantarum via le système NICE. Les souches de L. plantarum sont
cultivées en milieu MRS (sans antibiotiques pour la souche sauvage NCIMB8826) ou en
MRS supplémenté avec 10 µg.mL -1 en chloramphénicol. La nisine est ajouté à DO600nm =
0,35. L’expression des transporteurs mleP de L. lactis et O. oeni, est induite par ajout de
30, 50 et 70 ng.mL -1 de nisine. MleP de L. lactis est surexprimé lorsque 50 ng.mL -1 de
nisine sont ajoutés dans le milieu de culture. Aucune détection n’est obtenue pour le
transporteur MleP de O. oeni, induit dans les mêmes conditions. Le contrôle positif est
une protéine contenant un HisTag et sert de témoin pour la détection par Western blot.
Création d’un vecteur suicide pour muter le gène mleP de O. oeni
La création de vecteurs suicide adaptés à la mutagénèse chez O. oeni était un des
objectifs à atteindre du projet européen. Cette stratégie permettrait d’éviter les problèmes
rencontrés lors de la surexpression (et même de l’expression) de gènes chez O. oeni, à savoir
entre autres la toxicité, la reconnaissance des régions promotrices, etc… Après l’échec obtenu
dans l’obtention de mutants, pour le gène de l’ornithine décarboxylase chez O. oeni, par
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