THESE Maryse Bonnin Jusserand - Université de Bourgogne

Espèce Souche Marqueurs d'intérêt, propriétés Source
E. coli EC101 gène repA du pWV01 intégré au chromosome Law et al, 1995
B. subtilis 168 Néant souche du laboratoire
Matériels et méthodes
O. oeni ATCC BAA-1163 Néant souche du laboratoire
O. oeni BR14/97 productrice de putrescine et de cadavérine Guerrini et al, 2002
L. hilgardii 0006 productrice d'histamine Lucas et al, 2005
MATERIELS ET METHODES
Chapitre I : clonages et méthodes analytiques
I. Souches bactériennes utilisées et milieux de culture
E. coli et B. subtilis sont cultivés en milieu Luria Broth (LB) (Bertani, 1951) à 37°C
sous agitation. Le milieu LB est composé de : 10 g.L -1 de bacto-tryptone, 5 g.L -1 d’extrait de
levure et de 10 g.L -1 de NaCl à pH 7.
O. oeni est cultivé en milieu FT80 (Cavin et al, 1989) dont la composition est la
suivante : 5 g.L -1 d’extrait de viande, 5 g.L -1 d’extrait de levure, 5 g.L -1 de glucose, 3,5 g.L -1
de fructose, 10 g.L -1 d’acide D,L-malique, 0,6 g.L -1 KH2PO4, 0,45 g.L -1 KCl, 0,13 g.L -1
CaCl2, 2H2O, 3 mg.L -1 MnSO4, H2O, 0,13 g.L -1 MgSO4, 7H2O et 1 mL.L -1 de tween 80 ; ou
en milieu LAC composé de 78 mL.L -1 de jus de raisin blanc, 33 g.L -1 d’extrait de levures, 0,6
mL.L -1 de tween 80, 80 mg.L -1 MnSO4, H2O à 28/30°C, en culture statique.
Lactobacillus hilgardii est cultivé en milieu CarrM (Lucas et al, 2005) composé de : 4
g.L -1 de casamino acids, 3 g.L -1 d’extrait de levures, 5 g.L -1 de glucose , 10 g.L -1 de D,L-
malate, 0,44 g.L -1 KH2PO4, 0,34 g.L -1 KCl, 0,1 g.L -1 CaCl2, 0,002 g.L -1 MnSO4, 0,1 g.L -1
MgSO4 et 2 g.L -1 d’histidine à pH 4,8 pour maintenir une pression de sélection afin de ne pas
perdre le plasmide pHDC (Lucas et al, 2005) contenant entre autres les gènes codant
l’histidine décarboxylase et l’antiport histidine/histamine.
Tableau 4. Souches bactériennes utilisées.
66