APPUNTI DI PATOLOGIA GENERALE - Camice d'Oro

ibosoma, causando un precoce rilascio delle catene peptidiche nascenti e quindi una interruzione della sintesi
proteica.
L'interesse per la puromicina è più che altro sperimentale al fine di misurare il numero di catene peptidiche nascenti
presenti in P attraverso l'impiego di puromicina radioattiva o di aminoacidi radioattivi.
Se un animale assume puromicina e questa va nel fegato, si trova inizialmente steatosi epatica, perché una delle cause
patogenetiche della steatosi è il blocco della sintesi proteica e impossibilità di produrre apolipoproteine per il trasporto
dei lipidi, ma in seguito si arriva fino alla necrosi per interruzione delle sintesi macromolecolari.
LE TOSSINE
Tossina difterica
• E’ una esotossina proteica prodotta da Corynebacterium diphtheriae.
• L’infezione si localizza a faringe e laringe e provoca una infiammazione fibrinosa necrotizzante.
• Più gravi lesioni si manifestano a distanza dalla sede dell'infezione, nel cuore (steatosi e necrosi a focolaio), nel
fegato (steatosi), nel rene (degenerazione a gocce ialine, steatosi e infine necrosi tubulare); si accompagnano
segni di neurite tossica con paralisi del velopendulo, dei muscoli oculari, dei muscoli faringei e laringei.
• Le lesioni sono prodotte dalla tossina che si diffonde per via ematica e sono sperimentalmente riproducibili con
l'iniezione della sola tossina, in assenza di infezione.
• Molti animali come la cavia, il coniglio e la scimmia hanno la stessa sensibilità dell'uomo alla tossina: pochi
ug sono letali per l'uomo.
• Una misura standard della tossicità è la dose minima letale (DML) per la cavia: è la dose necessaria per
causare la morte di una cavia di 250 g di peso corporeo in 4-5 giorni, ed è circa 60 ng.
◦ altra misura è la LD50 = dose letale per il 50% degli animali in cui è iniettata
Meccanismo d'azione della tossina difterica
• Cellule in coltura sono sensibili all’azione della tossina.
• La lesione biochimica più precoce provocata dalla tossina nelle cellule in coltura è l'inibizione delle sintesi
proteiche.
• L’inibizione delle sintesi proteiche si ha anche in sistemi acellulari, costituiti da componenti purificati
(ribosomi, enzimi solubili, mRNA, tRNA, aminoacidi, e ATP e GTP come fonte di energia).
• L’effetto della tossina in sistemi acellulari richiede la presenza di un cofattore cellulare termostabile e
dializzabile, identificato con il nicotinamide-adenina-dinucleotide (NAD).
• Il bersaglio della tossina è stato identificato nell'EF-2 (elongation factor 2), l'enzima che catalizza la
translocazione nel ciclo di elongazione peptidica.
• La tossina si comporta come un enzima che catalizzala formazione di un legame covalente tra un frammento
del NAD, l'ADPribosio, e la molecola di EF-2, con formazione di ADPribosil-EF2.
• L’ADPribosil-EF2 è inattivo nelle sintesi proteiche perché, pur legando il GTP, è incapace di translocare il
peptidil-tRNA dal sito A al sito P.
• Le catene peptidiche nascenti si bloccano nel sito A.
• Perciò non possono essere aggiunti ulteriori aminoacil-tRNA
Tossina difterica: struttura e penetrazione nelle cellule
• Mentre poche specie sono sensibili alla tossina, in tutti gli estratti di cellule eucariotiche la tossina inattiva
l'EF- 2.
• Ciò si spiega tenendo conto della struttura della tossina e del suo meccanismo di penetrazione cellulare.
• La molecola di tossina è rilasciata dalla cellula batterica come singola catena polipeptidica.
Appunti di Patologia Generale – Pag, 52