Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

CZE˛ŚĆ I
3. Za pomocą 1-mililitrowej kalibrowanej pipety odmierzyć 0,5 ml roztworu
antygenu i dodać w opisany poniżej sposób:
• Trzymać pipetę w 1 / 3 wysokości butelki. Nie dotykać roztworu soli.
• Mieszając ręcznie ruchem kolistym o średnicy około 5 cm, dodawać po
kropli antygenu.
• Wkraplać antygen w ten sposób przez około 6 sekund, a następnie dodać
pozostały antygen z pipety.
• Mieszać jeszcze przez 10 sekund.
4. Dodać 4,1 ml buforowanego roztworu soli, wlewając gopościankach butelki.
5. Zamknąć butelkę szklanym korkiem i wstrząsać wgórę iwdół około 30 razy
przez 10 sekund.
6. Pozostawić zawiesinę antygenu na co najmniej 10 minut. Wstrząsnąć
delikatnie przed użyciem. Zawiesinę należy wykorzystać w ciągu 8 godzin.
7. W przypadku badania płynu mózgowo-rdzeniowego rozcieńczyć antygen 10%
roztworem soli w stosunku 1:2. Wstrząsać butelkę delikatnie przez 10 sekund,
pozostawić na co najmniej 5 minut i użyć najpóźniej w ciągu 2 godzin.
Jakościowy odczyn VDRL
1. Za pomocą 1,0-mililitrowej pipety kilkakrotnie wymieszać, a następnie
umieścić 0,05 ml inaktywowanej surowicy we wgłębieniu szklanej płytki
VDRL.
2. Rozprowadzić surowicę okrężnymi ruchami końcówki pipety, tak by pokryła
całą wewnętrzną powierzchnię parafinowego lub ceramicznego wgłębienia.
Jedynie użycie czystych płytek umożliwia równomierne rozprowadzenie
surowicy.
3. Trzymając poziomo strzykawkę z 18-podziałkową igłą, do surowicy dodać
uważnie 1 kroplę antygenu (1/60 ml). Nie dotykać surowicy igłą.
4. Płytki w komorze wilgotnej wstawić na 4 minuty do wytrząsarki. Jeśli
wytrząsarka nie jest dostępna, płytki kołysać ręcznie, ciągłym ruchem kolistym
przez 4 minuty.
5. Natychmiast po wymieszaniu ocenić preparat pod mikroskopem w powiększeniu
× 10 okular i × 10 obiektyw.
6. Odczytać reakcje w poniższy sposób:
Średnie i duże grudki
R — Reactive/Dodatnia
Drobne grudki
W — Weakly reactive/Słabo dodatnia
Brak grudek lub bardzo słaby ślad N — Non-reactive/Ujemna
Surowica słabo dodatnia lub wykazująca śladowy odczyn, ze względu na
obserwowane niekiedy reakcje prozony, powinna zostać powtórnie zbadana
w teście półilościowym.
Półilościowy odczyn VDRL
1. Przygotować serie podwójnych rozcieńczeń inaktywowanej surowicy w 0,85%
NaCl (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32).
2. Dla każdego rozcieńczenia surowicy przeprowadzić badanie jakościowe.
3. Zapisać wyniki i zgodnie z poniższymi przykładami określić najwyższe
dodatnie rozcieńczenie surowicy (nie słabo dodatnie):
4. W przypadku dodatnich wyników obserwowanych w rozcieńczeniu 1:32
przygotować kolejne podwójne rozcieńczenia w 0,85% NaCl (1:64, 1:128
i 1:256) i przeprowadzić ponownie badanie jakościowe.
145