Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..
Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..
Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
CZE˛ŚĆ I<br />
Podłoża transp<strong>or</strong>towo-wzbogacaja˛ce<br />
i posiew próbek kału<br />
Podłoża transp<strong>or</strong>towo-wzbogacające są powszechnie stosowane do izolacji<br />
Salmonella spp. i Vibrio cholerae zkału. W przypadku Salmonella spp. zalecane<br />
są buliony zawierające selenin F lub tetrationian, natomiast dla Vibrio cholerae<br />
stosowana jest alkaliczna woda peptonowa (APW, alkaline peptone water).<br />
Podłoża takie nie są zalecane w hodowli Shigella spp., Campylobacter spp.,<br />
Yersinia enterocolitica i Clostridium difficile.<br />
Procedura posiewu na podłoża wzbogacaja˛ce<br />
1. Przygotować zawiesinę kału zawieszając około 1 g próbki w probówce<br />
zawierającej 1 ml sterylnego fizjologicznego roztw<strong>or</strong>u soli. Jeśli próbka jest<br />
płynna, nie trzeba dodawać roztw<strong>or</strong>u soli. Wymazy z odbytu, świeże lub<br />
w podłożu Cary’ego-Blaira, wytrząsnąć w 1 ml fizjologicznego roztw<strong>or</strong>u soli.<br />
Przed wyrzuceniem wymazówki odcisnąć resztę płynu na ściance probówki.<br />
2. Ezą dodać trzy lub więcej oczek zawiesiny do odpowiedniego podłoża<br />
wzbogacającego.<br />
3. Inkubować bulion z seleninem F przez 18 godzin, APW przez 6 – 8 godzin.<br />
W niektórych lab<strong>or</strong>at<strong>or</strong>iach dwa lub trzy oczka zawiesiny początkowej w APW<br />
są przesiewane do świeżego APW i inkubowane przez kolejne 6 – 8 godzin.<br />
4. Przesiać hodowle z bulionu ezą na płytki z selektywnym i nieselektywnym<br />
podłożem.<br />
V. cholerae szybko rośnie w APW i przez 6 – 8 godzin przerasta inne mikro<strong>or</strong>ganizmy.<br />
Po dłuższej inkubacji, powyżej 8 godzin, pozostałe bakteriemogązdominować<br />
V. cholerae. Szczepy nie-V. cholerae O1 rosną szybciej niż V. cholerae O1 i,<br />
jeśli obecne są jednocześnie dwa serotypy, mogą przerosnąć całą płytkę.<br />
Podłoża do hodowli patogenów jelitowych<br />
Dla Shigella spp., Salmonella spp. i Y. enterocolitica zalecane są podłoża<br />
stosowane do posiewu ogólnego o niskiej selektywności <strong>or</strong>az podłoża ośredniej<br />
lub wysokiej selektywności. Agar MacConkeya z fioletem krystalicznym jest<br />
zalecany jako podłoże podstawowe. W przypadku Y. enterocolitica agar MacConkeya<br />
należy inkubować przez dzień w35°C, a następnie, przez kolejny dzień,<br />
w temperaturze pokojowej (22 – 29°C).<br />
Agar ksylozo-lizyno-deoksycholanowy (XLD) jest rekomendowany jako podłoże<br />
ośredniej lub wysokiej selektywności do izolacji Shigella spp. i Salmonella spp.<br />
Agar deoksycholanowo-cytrynianowy (DCA), agar Hektoen dla pałeczek jelitowych<br />
(HEA) lub agar Salmonella-Shigella (SS agar) mogą być stosowane<br />
alternatywnie. Shigella dysenteriae typ 1, S. sonnei i enteroinwazyjne E. coli nie<br />
rosną dobrze na agarze SS. Jednakże agar SS może być wyk<strong>or</strong>zystany do izolacji<br />
Y. enterocolitica z zastosowaniem zasad izolacji opisanych dla agaru MacConkeya.<br />
Wiele lab<strong>or</strong>at<strong>or</strong>iów do izolacji Salmonella typhi i innych gatunków<br />
Salmonella stosuje agar siarczanowo-bizmutowy.<br />
Dla Campylobacter spp. stosowanych jest kilka podłoży selektywnych (Blaser,<br />
Butzler, Skirrow), zawierających różne dodatki antybakteryjne. Można również<br />
53
Change language