Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

CZE˛ŚĆ I
Identyfikacja
Identyfikacja powinna zostać przeprowadzona możliwie najszybciej. Jeśli masywna
infekcja dróg moczowych wywołana jest przez E. coli, do identyfikacji
czerwonych kolonii na podłożu agarowym MacConkeya należy użyć szybkiego
testu.
Test β-glukuronidazowy do szybkiej identyfikacji
E. coli 1
Test określa zdolność drobnoustroju do wytwarzania enzymu β-glukuronidazy.
Enzym hydrolizuje kwas 4-nitrofenylo-β-D-glukopyranozydouronowy (PGUA),
produkt reakcji kwasu glukuronowego i p-nitrofenolu. Pojawienie się żółtego
zabarwienia wskazuje na reakcję dodatnią.
Procedura
1. Przygotować gęstą mleczną zawiesinę bakterii w małej probówce zawierającej
0,25 ml fizjologicznego roztworu soli. Zawiesina powinna zostać przygotowana
z kolonii rosnących na podłożu agarowym MacConkeya.
2. Rozpuścić 300 mg kwasu 4-nitrofenylo-β-D-glukopyranozydouronowego
(PGUA) i 100 mg wyciągu drożdży (Oxoid L21) 2 w 20 ml buforu fosforanowego
(bufor Tris, pH 8,5). Uzyskać pH 8,5 ± 0,1. Dodać 0,25 ml podłoża
do każdej z przygotowanych sterylnych probówek. Zamknąć probówki.
Oznaczyć probówki jako PGUA i wpisać datę.
3. Zawiesić w jednej z probówek z PGUA badaną gęstą zawiesinę bakterii.
Inkubować probówkę przez 4 godziny w 35°C. Pojawienie się żółtego
zabarwienia wskazuje na obecność β-glukuronidazy (wynik dodatni); jeśli nie
pojawia się zmiana zabarwienia, wynik jest ujemny. Obecność żółtego
pigmentowania wskazuje na brak wiarygodności testu; w takich przypadkach
test należy powtórzyć.
Szczepy kontrolne:
Escherichia coli dodatni (żółty) wynik
Shigella flexneri ujemny (bezbarwny) wynik
Tabletki PGUA są dostępne komercyjnie.
Oznaczanie lekowrażliwości
Antybiogram (str. 112) powinien być wykonany tylko dla istotnych, według
przedstawionych powyżej kryteriów, czystych hodowli zawierających kolonie
o jednakowej morfologii. Oznaczanie wrażliwości ma zazwyczaj większe
znaczenie dla pacjentów hospitalizowanych lub z nawracającymi zakażeniami
dróg moczowych w wywiadzie. Szczepy uzyskane w posiewach od pacjenta
z ZUM występującym po raz pierwszy mogą nie wymagać wykonania antybiogramu.
1
Kilian M., Borrow P.: Rapid diagnosis of Enterobacteriaceae. 1. Detection of bacterial glycosidases.
Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica, Section B, 1976, 84: 245 – 251.
2
Dostępny z Oxoid Ltd, Wade Road, Basingstoke, Hampshire, RG24 8PW, England.
47